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《基因工程实验技术》实验教学大纲 课程代码：1000254 课程负责人：喻 红 课程中文名称：基因工程实验技术 课程英文名称：Experimental Technology of Genetic Engineering 课程类别：必修 课程学分数：1 学分 课程学时数：实验时数27 面向专业：临床医学及口腔医学八年制 本课程的前导课程：医学基础化学、医学有机化学、细胞生物学、生物化学，分子生物学 一、实验教学目的和基本要求 基因工程是在分子水平上，用人工的方法提取或者合成某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA分子引入受体细胞，使外源DNA在受体细胞中进行复制和表达。按照人们的意愿创造生物新性状，使之稳定的遗传给下一代。所以基因工程具有广阔的应用前景，既能为工农业生产和医药保健等开拓新途径，又能为生物的细胞分化，生长发育，肿瘤发生等基础研究提供有效的实验手段。目前，基因工程实验技术已经成为生物学领域许多实验室的常用技术，也可以说是生物技术的核心技术，是生物技术专业学生必须掌握的内容。本课程通过对一些基本的基因工程实验技术的操作，使学生得到初步的锻炼，了解分子生物学技术在医学研究领域的应用，更重要的是在实验中培养学生的实验操作能力、分析问题和解决问题的能力，养成严肃认真、实事求是的科学态度和严谨的工作作风，培养学生的创新精神和创新能力，也为以后从事生物工程领域的相关科研、教学及生产工作奠定基础。 教学的基本要求： 1．熟悉和掌握常用基因工程技术实验仪器的使用方法，了解、掌握各种实验技能、技术、手段和方法，更重要的是了解各种实验研究方法的应用。 2．培养学生独立思考和独立工作的能力，学会联系理论知识，独立设计和进行实验，仔细观察和分析实验现象，学会正确处理数据及解释现象，从中得出科学的结论。 3．培养严谨科学的工作态度和作风，培养创新能力，为学习其他课程和今后从事医学领域的科研打下坚实的基础。 二、主要仪器设备 电冰箱 制冰机 气浴恒温振荡器 电热鼓风干燥箱微波炉 磁力搅拌器 电动搅拌机 电磁炉恒温水浴锅部分收集器 蠕动泵 实验项目 名称 实验要求 学时 实验属性 每组人数 指导 教师 已开/未开 1 质粒DNA的小量碱裂解法提取及琼脂糖凝胶电泳鉴定 概述基因工程基本流程及在医学中的应用（目的基因的获取；质粒载体在基因工程中的应用；原核表达体系及真核表达体系，外源基因的表达和产物分离纯化；基因工程与医学实践的结合） 了解质粒作为载体在基因工程中的应用。熟悉质粒提取的基本原理和方法。复习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的结果 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的方法。 4+6 综合 24 生化系分子生物学课程组 已开 2 感受态细菌制备；重组质粒的连接、转化、平板筛选； 熟悉感受态细菌制备、质粒转化的基本方法和操作过程。 掌握细菌质粒平板筛选的基本方法和操作技巧 5+2 综合 24 生化系分子生物学课程组 已开 3 重组质粒DNA的限制性酶切分析及电泳鉴定 巩固DNA重组技术的基本概念及原理。掌握限制性核酸内切酶酶切电泳鉴定重组DNA的方法。 3 综合 24 生化系分子生物学课程组 已开 4 重组蛋白在E.coli菌株中的诱导表达与诱导前后鉴定（SDS） 掌握目的基因在E.coli中表达的基本原理和诱导表达方法。掌握蛋白质的SDS的基本原理和操作方法 4 综合 24 生化系分子生物学课程组 已开 5 外源目标融合蛋白的分离纯化His融合蛋白的高效分离纯化及鉴定、 24 生化系分子生物学课程组 已开 6 实验多媒体教学和讨论 巩固和加深学生对基因工程技术的认识与掌握，讨论真核基因在原核生物中的表达策略，培养学生独立设计和解决问题的能力 3 综合 24 生化系分子生物学课程组 已开 四、教材与参考书 教材：《基因工程实验实时更新 电子教学视频实验6. 参考书： 药立波，主编.医学电子书包（iMED），人民军医出版社，2015 Lee W. Janson, Marc E. Tischler. The Big Picture: Medical Biochemistry (First Edition) (英文原版）McGraw Hill (ISBN: 978-0-07-163791-6) 2012 J.萨姆布卢克等著，黄培堂译. 《分子克隆实验指南》（第三版）科学出版社2002 Hubert Rehm。《蛋白质生物化学与蛋白质组学》（第一版）科学出版社2007 陈主初，肖志强.《疾病蛋白质组学》（第一版）化工出版社2006 Hubert Rehm. Protein Biochemistry and Proteomics. (英文原版引进，第一版）科学出版社200