小鼠输精管结扎和简单精子操作.pptVIP

值日 5-6节 3-3、4-1 1-2节 2-2、2-3 3-4节 3-3、4-1 * * 小鼠输精管结扎和简单精子操作 实验目的 掌握小鼠手术的基本技巧 学习雄性小鼠生殖系统特点 练习显微操作技术 实验内容 雄性小鼠生殖系统观察 小鼠输精管结扎 使用移卵装置操作精子 设备、耗材 雄性小鼠 ? 手术器械（外科镊、眼科镊、手术剪、手术弯针、解剖针、止血钳、1 ml注射器各一把） 酒精灯 酒精棉球 消毒酒精 苯扎溴胺 盆（配消毒水洗手术器械） 戊巴比妥钠以 6.7mg/ml （生理盐水配制） 乙醚 无菌生理盐水 1L或2L玻璃烧杯或搪瓷杯（麻醉用） 缝合线 蜡盘 细绳 脱脂棉 纱布 显微镜、解剖镜 凹玻片 载玻片 ? 大头针 麻醉 麻醉方法1： 拇指和食指捏住小鼠头部皮肤，小鼠背靠手掌，将尾巴固定在小指和无名指缝中，此时小鼠牢固被固定在左手中。使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部沿髂骨上缘水平、靠近腹白线的两恻进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即 可缓缓注射药液。注射量为0.1-0.2ml/10g体重。 输精管结扎 麻醉方法2： 用浸润乙醚的棉球或纱布放在密闭的容器内，再将动物放入，并注意动物的行为。开始时动物出现兴奋，进 而出现抑制，自行倒下，当动物角膜反射迟钝、肌紧张降低，即可取出动物。若动物逐渐开始恢复肌紧张（重新挣扎）则重复麻醉一次，待平静后即可进行实验。若 实验时间长，可先保定动物在实验台上，将乙醚棉球或纱布靠近其鼻部，即可开始实验。实验过程中，应注意动物的反应，适时追加乙醚吸入量，维持其麻醉深度和 时间。 输精管结扎 消毒 输精管结扎 将小鼠腹面向上放在手术蜡盘上 用细绳将小鼠四肢固定在蜡盘上 用70%酒精擦拭小鼠腹部 用棉花擦干 观察小鼠第二性征 剪去腹部被毛（可不做） 腹部横切法 输精管结扎 在下肢上端水平线正中用剪刀横向剪开1.5 cm，同样剪开腹壁。用缝皮针缝住腹壁切口边缘 用眼科镊斜向下方夹住一侧的脂肪垫将睾丸、附睾和输精管拉出切口 腹部横切法 钝性分离输精管约1 cm 用眼科剪在两侧剪断 夹住脂肪垫将睾丸放回腹腔 同上处理另一侧 缝合腹壁 缝合皮肤 输精管结扎 阴囊纵切法 输精管结扎 轻压腹腔，将睾丸推回阴囊 沿阴囊正中线开口1 cm 确定白色的阴囊壁中线 阴囊纵切法 在中线左侧的阴囊包膜上切开5 mm 向左推睾丸，找到输精管，夹出切口 剪断1 cm 处理右侧睾丸 缝合切口 输精管结扎 术后处理 术后小鼠放回鼠笼 用50 W白炽灯加热，以维持体温。 小鼠苏醒后放回饲养间 输精管结扎 取精 断颈处死小鼠 开腹，取出睾丸、附睾和输精管，放在载玻片上 在解剖镜下观察结构 用注射器吸取0.1 ml生理盐水 用注射器针尖挑开附睾尾，用解剖针或镊子轻压附睾尾 用注射器吸取精液，注入凹玻片 精子操作 挑单精子 用10倍镜观察精子活力注意镜头不要沾水，用40倍镜时应加盖片或取一滴在载片上，盖上盖片观察 组装口吸管 用口吸管吸取单个精子，放入另一个凹处（先加一点生理盐水）能否连续取出10个精子？分别放入凹片？ 精子操作 整理器材 手术器材和凹片洗净，放在来苏儿水盆中（1-1小组水池边）消毒，放回原处，凹片放入讲台上的烧杯中 分拆移卵装置，弃去枪头，毛细管自己保管或丢弃，其余放回计算机台上 清理杂物，收拾台面 作业 雄性小鼠外观特点 你选用的结扎方法、效果 附睾和输精管的形态 口吸管使用效果 注意写明你在小组实验中亲手操作了那些步骤 用E-Mail交报告 shuangjl@nju.edu.cn