黄曲霉检测方法研究进展综述.docVIP

《科技论文写作与实践》课程论文 黄曲霉毒素检测方法研究进展 姓 名: 谢桂焕 专业年级： 09生物信息学 学 号: 090567011 总 成 绩： 完成时间： 2012-11-13 黄曲霉毒素检测方法研究进展 谢桂焕 （福建农林大学生命科学学院 09生物信息学 福州 350002） 摘要 ：黄曲霉毒素是剧毒性物质，多在食品中发现，对人类危害极大。概述了黄曲霉毒素的理化性质及危害，讨论了黄曲霉毒素的各种检测方法如薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等，并对未来黄曲霉毒素的检测方法进行了展望。 关键词：黄曲霉素；危害；检测方法 引言：食品安全是人们都极其关注的, 尤其是绿色食品和有机食品概念的提出更加增加人们对食品安全的关注。食品安全的影响因素很多, 其中AF的危害是比较突出的一个问题[1]。 黄曲霉毒素( Aflatoxin, 简称AF)是由真菌黄曲霉和寄生曲霉产生的一组强毒性的次生代谢产物,尤其AFB1是目前发现的真菌类毒素中毒性最大、污染范围最广的毒素之一[2]。对它的研究是目前国内外关注的热点。在世界不同地区发现了这些真菌大量存在于供人类食用的食品中, AF污染已导致严重的食品安全问题[3]。自20世纪60年代以来, 有关AF的危害被大量报道, 以致AF已成为最受人们关注的一种真菌毒素。因此, 寻求准确、快速、简便的检测方法[4], 对AF进行高效的定性定量的分析, 是AF研究的一个重要方面。 正文 1、AF的概况 AFT在紫外线下发特定的荧光, 根据荧光颜色不同, 将其分为蓝紫色荧光的B族和黄绿色荧光的G族两大类及其衍生物[5]。最具有代表性为AFB1、黄曲霉毒B2( AFB2) 、黄曲霉毒素G1( AFG1) 、黄曲霉毒素G2 ( AFG2 ) 。AF 难溶于水、己烷、石油醚, 易溶于甲醇、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺等有机溶剂。在中性溶液中较稳定, 在强酸性溶液中稍有分解, 在pH9~10的强碱溶液中迅速分解成无毒的盐, 易被碱或强氧化剂破坏。纯品为无色结晶, 耐高温, 分解温度为268e, 紫外线对低浓度AF有一定的破坏性。在自然条件下, 食品中AF 稳定性很强。被AFB1 污染的稻谷, 室温下自然存放可长达20多a。 AF主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中, 食用了被AF污染的食物后, 会对机体造成损害甚至危及生命。AF对人和动物危害与AF抑制蛋白质的合成有关。研究表明[6-7]，AF的细胞毒作用是干扰RNA和DNA的合成，进而干扰细胞蛋白质的合成，导致全身性伤害。AFB1 具有很强的致畸、致癌、致突变的作用, 其毒性因动物的种类、年龄、性别、体况以及营养状况的不同存在差异, 年幼动物、雄性动物较敏感, 主要损害动物的肝脏。经常食用含有AF饲料的奶牛, 其产奶量明显下降, 同时奶中含有代谢物AFM1和AFM2 等毒素。人食用了被AF污染的食物, 会通过消化系统进入肝脏、肾脏等内脏中, 部分会存在肌肉等组织中。试验证明, 用含有AF的食物来喂食小鼠, 其先后出现肝癌、胃癌、肾小管腺癌等病变。AFB1 与DNA的共价结合抑制DNA的甲基化, 从而改变基因表达和细胞分化, 激活哺乳动物细胞内致癌基因的转化形成。食用被AFT污染的食品, 会出现急性中毒, 临床表现以黄疸为主, 并有呕吐、厌食和发烧等症状, 重症者甚至死亡。 2、检测方法 2.1 薄层层析法( TLC) TLC是测定AF的主要方法, 多数国家都把它做为国标中的主要测定方法。其原理是样品经过提取、柱层析、洗脱、浓缩、薄层板展开分离后, 在365nm紫外灯下, AFB1、AFB2、AFG1和AFG2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。并根据其在薄层上显示的最低检出量来确定其含量。所用设备简单、费用低廉、容易掌握, 适用大量样品的分离、筛选,一般的实验室均可开展, 属于定性和半定量检测。 Stroka[ 8]开发出的光度检测器在检测AF时, 最低限可以检测到1ng。Otta等[9]在TLC上结合光度计, 不仅能把样品提纯, 而且也能同时1次对多个样品进行检测。江湖等[ 10]利用TLC检测农产品中的AFT, AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的检出限达018、014、017、014Lg/ kg。TLC有单向展开和双向展开法, 其中双向展开法能进一步除去样品中的杂质, 提高灵敏度, 省略了柱层析等净操作步骤。TLC法由于设备简单, 一般实验室都能满足,利于普及, 仍是现在检测AFT 的主要方法之一。 2.2 高效液相色谱法（HTLC） H