生物化学简明教程 第六章 酶.ppt

盐析 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[（NH4)2SO4，Na2SO4，Na2SO4]，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 盐析作用是由于当盐浓度较高时，盐离子与水分子作用，使水的活度降低，原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水化水，从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用，破坏蛋白质分子表面的水化层。 分段盐析 不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极性基团的种类、数目以及排布的不同，其水化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度也不一样，因此调节蛋白质的中盐浓度，可以使不同的蛋白质分别沉淀。 血清 球蛋白 清蛋白 (NH4)2SO4 50%饱和度 饱和 析出 析出 蛋白质溶液 透析袋 蒸馏水 常用的盐析剂是硫酸铵，因为它的盐析能力强，在水中的溶解度大，价格便宜，浓度高时也不会引起蛋白质活性丧失。 盐析沉淀的蛋白质仍保持天然构象，即仍有活性。 蛋白质用盐析方法沉淀分离后，还需要脱盐才能进一步精提纯。 脱盐常用透析法。 透析是将含有小分子杂质的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里放在蒸馏水中进行，可不断更换蒸馏水，直至杂质被除去。 有机溶剂法 与水互溶的极性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮等能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。 有机溶剂引起蛋白质变性的原因有两个： （1）降低水的介电常数，使蛋白质分子表面可解离基团的离子化程度减弱