生物离心-区带分离.pptxVIP

区带离心法区带离心法原理：利用各种粒子的沉降速度和浮力密度差，当一定粒子到达与其密度相同的梯度位置时则停止沉降，不同粒子处于不同位置，则得到了分离。分类: A、差速区带离心法 B、等密度区带离心法分离后形成样品的各自区带小 大密 度 梯 度 液正 梯 度 15%样品的密度大于梯度液的密度形成负梯度25%35% A、速率区带离心： 速率区带离心法依据样品中各组分沉降速率的差别而使其互相分离。在离心管中灌制好预制的一种正密度梯度介质液，在其表面铺上一层样品溶液，离心期间，样品中各组分会按照它们各自的速率沉降，被分离成一系列的样品组分区带，故称速率区带离心。 预制密度梯度介质的作用有二个，一是支撑样品，二是防止离心过程中产生的对流对已形成区带的破坏作用。但是样品液的密度一定要大于密度梯度介质的最大密度，否则就不能使样品各组分得到有效分离。 离心过程中，各组分的移动是相互独立的。因此，S值相差很小的组分也能得到很好的分离，这是差速离心法做不到的。但速率区带离心不适于大量制备实验。 注意点：?严格控制离心时间?颗粒密度大于介质密度ρpρm?事先配成较平缓的连续密度的梯度溶液?不能用角式转头、只能用水平式转头?不能用刹车分离蛋白质，RNA和核糖体这类生物大分子是比较理想的。分离后形成样品的各自区带图a用预制密度梯度的等