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哮喘类中药制剂中非法添加化学药品检测方法讨论 　　哮喘作为常见病、多发病，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病，哮喘本身不易治疗，且易引起许多其他疾病。中药以其疗效独特、毒副作用小、安全有效的特点在治疗慢性病方面虽有其优势，但短期疗效不如西药理想。近年来，一些不法生产厂家及私人诊所为了迎合患者用药不良反应少、见效快的需求，以纯中药制剂之名、行添加化学药之实，在中成药中非法添加化学药品，患者在毫不知情的情况下长期、大量服用此类制剂，极易引发严重的不良反应，损害身体健康。本文参考有关文献，拟建立检测方法，对哮喘类中药制剂中非法添加的五种糖皮质激素类化学药品(醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、泼尼松、地塞米松)进行定性和定量分析。建立了快速、准确的分析方法。 　　1　仪器与试药 　　1.1　仪器 　　日本岛津公司2010高效液相色谱仪，LC-10AT　vp输液泵，SPD　10Avp可变波长紫外检测器，TA-130柱温箱，ANASTAR色谱数据处理系统。 　　1.2　试剂与试药 　　对照品：醋酸泼尼松(10012-0105)，醋酸氢化可的松(0013-0106)，泼尼松(100199-199401)，醋酸地塞米松(100122-200804)，地塞米松(100129-200303)，以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，10批样品购于药房及私人诊所。 　　2　方法与结果 　　2.1　TLC法测定 　　2.1.1　供试品溶液制备　取样品约一次性用量，加甲醇适量，超声溶解20min，滤过，将滤液于水浴上蒸干，加甲醇1mL使溶解，即得。 　　2.1.2　对照品溶液制备 　　取醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、泼尼松、醋酸地塞米松、地塞米松对照品适量，加甲醇制成各含1mg/mL的对照品溶液。 　　2.1.3　薄层色谱法 　　按薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10mu;L，对照品溶液各5mu;L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮(1.5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视。结果显示，有3批供试品在醋酸泼尼松处出现阳性斑点。 　　2.2　HPLC法测定 　　2.2.1　色谱条件 　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(40∶60)为流动相;检测波长为240nm。 　　2.2.2　对照品溶液配制 　　取上述5种对照品溶液各10mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，制成0.1mg/mL的储备液。分别精密吸取储备液，甲醇适量稀释，制成每1mL中约含1、5、10、25、50mu;g的系列标准溶液。 　　2.2.3　供试品溶液配制 　　取样品适量，研匀，精密称取一次口服剂量，加甲醇适量溶解，定容至50mL容量瓶中，超声提取20min，放冷，加甲醇补足减失的重量，过滤，精密吸取2mL，加流动相定容至10mL容量瓶中，过0.45mu;m 微孔滤膜滤过，备用。 　　2.2.4　空白溶液配制 　　取TLC法鉴别项下未检出添加化学药品的供试品，按上述供试品制备方法配制，制成空白溶液。 　　2.3　方法学考察 　　2.3.1　系统适用性试验 　　取对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各10mu;L，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由色谱图可知，各目标对照品分离度良好，空白溶液中的中药成分不干扰测定。 　　2.3.2　检测限 　　以信噪比为3∶1时的对照品进样量作为检测限，醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、泼尼松、醋酸地塞米松、地塞米松的检测限分别为1.2、1.1、1.4、1.3、1.3ng。 　　2.3.3　线性关系试验 　　取各组分浓度约为1、5、10、25、50mu;g/mL的系列标准溶液10mu;L注入高效液相色谱仪，记录色谱峰峰面积。以对照品浓度(mu;g/mL)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。结果表明，各组分浓度在1～50mu;g/mL范围内线性关系良好。 　　2.3.4　稳定性试验 　　精密吸取混合对照品溶液分别于0、2、4、6、12h进样，记录色谱峰面积，计算RSD。结果表明，对照品溶液在12h内稳定。5种目标对照的RSD 分别为0.61%、0.59%、0.68%、0.49%、0.72%。 　　2.3.5　重复性试验 　　取供试品(含醋酸泼尼松)精密称定6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，吸取10mu;L注入高效液相色谱仪，将峰面积带入标准曲线计算含量。结果RSD为1.3%，表明该方法重复性良好。 　　2.3.6　回收率试验 　　取不含添加化学物质的中药制剂1批，称取9份，每份取1次口服剂量，分别加入