瘤果黑种草子提取物对支气管平滑肌解痉作用的讨论.docVIP

瘤果黑种草子提取物对支气管平滑肌解痉作用的讨论 　　瘤果黑种草Nigella glandulifera Freyn. 属毛茛科黑种草属金莲花亚科植物，主产地新疆，是新疆特有的植物资源，其种子具油性及特异芳香，性味甘、辛、温，为我国新疆维吾尔族常用药材。黑种草子在维吾尔医临床应用，对哮喘和呼吸困难有治疗作用，是呼吸道疾病常用的维药之一，如治哮喘，用黑种草子拌蜂蜜冲服。目前，国内外对瘤果黑种草的研究仅限于部分化学以及醇提物的抗氧化、黑种草子油的抗血栓等作用研究，对瘤果黑种草子对支气管平滑肌药理作用的实验研究作者未见报道。本文拟研究瘤果黑种草子提取物( 油脂、非油脂) 对支气管平滑肌解痉作用，并探讨其作用机制，为进一步研究和开发该民族药材奠定基础。 　　1 材料与仪器 　　1. 1 动物昆明种( KM) 小鼠，SPF 级，体质量18 ～ 22g，雌雄各半; 豚鼠，普通级，体质量350 ～ 450g，雌雄各半，由新疆医科大学实验动物中心提供[生产许可证: SCXK( 新) 2011 - 0004]。 　　1. 2 药品与试剂瘤果黑种草子购自新疆和田墨玉县，经新疆中药民族药研究所研究员李晓瑾鉴定为Nigella glandulifera Freyn.的种子，批号: 2011308; 称取干燥已粉碎黑种草子置于超临界CO2萃取釜中，经预实验确定萃取条件( 萃取温度40 ℃，萃取压力29 MPa，解析压力I 12 MPa，温度56 ℃，解析压力II 6 MPa，温度50 ℃，萃取时间2 h，) 至萃取物不再增加为止，收集超临界萃取物即为黑种草子中的油脂类，油脂类加入2% 吐温- 80，配成相应给药浓度溶液; 萃取釜中的草子即为黑种草子的非油脂类，非油脂类溶于0. 5% CMC - Na，配成相应给药浓度溶液。氯化乙酰胆碱( 1g /瓶，上海三爱思试剂有限公司， ，磷酸组胺( 5g /瓶，上海蓝季科技发展有限公司， 110318) ，异丙肾上腺素溶液( 上海禾丰制药有限公 ，氨茶碱( 0. 1g /片，四川锡成药业有限公司， ，硫酸阿托品( 上海禾丰制药有限公 。 　　1. 3 仪器S124S 型电子天平( 北京赛多利斯仪器有限公司) ，AB104 - N 型万分之一电子天平( 上海梅特勒- 托利多仪器有限公司) ，支气管灌流装置( 新疆医科大学机能中心药理实验室) ，恒温水浴泵( 重庆试验设备厂一分厂制造) ，BL - 420 生物机能实验系统( 成都泰盟科技有限公司) ，HV - 20 型无油空压机( 济南浩伟实验仪器有限公司) 。 　　2 方法 　　2. 1 喷雾致喘实验选择在引喘预实验中引喘潜伏期gt; 15 s的小鼠50 只，随机分成5 组，每组10 只，雌雄各半。实验分组为: 生理盐水对照组、阳性药( 氨茶碱) 对照组( 100 mg /kg) 、水煎液对照组( 900 mg /kg) 、油脂低、高剂量组( 270，1 080 mg /kg) 及非油脂低、高剂量组( 630，2520 mg /kg) ，于末次给药后1 h 分别置于2. 5 L 的玻璃钟罩内，恒压引喘装置均匀并持续雾化喷入2%氯化乙酰胆碱和0. 1%磷酸组胺等量混合液15 s，记录小鼠的引喘潜伏期( 从喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难，直至抽搐跌倒的时间) ，超过360 s 以360 s 计算。 　　2. 2 豚鼠肺支气管灌流实验取体质量350 ～ 450 g 豚鼠36只，随机分为6 组，雌雄各半，每组6 只。分别为模型组、阳性对照( 异丙肾上腺素) 组( 50 mg /ml) 、水煎液对照组( 27 mg /ml) 、油脂低、中、高剂量组( 8. 2， 16. 4， 32. 8 mg /ml) 及非油脂低、中、高剂量组( 19， 38， 76 mg /ml) 。预先准备好肺支气管灌流装置，贮流瓶内充满含氧的乐氏营养液，经恒温( 37 ℃) 水浴中的蛇形管到达灌流套管贮液瓶的底面高出套管水平的20 ～ 30 cm。取豚鼠，木槌击毙，切开颈动脉放血，迅速打开胸腔，暴露心脏及肺，剪下一段气管，连同心脏及左右肺取出胸腔外，将肺浸入37 ℃含氧乐氏营养液的培养皿中，轻轻挤捏肺数次，以排除肺内的气体，再用注射器吸取数毫升乐氏营养液经气管注入肺内，使肺膨胀，然后将气管用线扎于灌流装置的套管上，开放并取下再字夹，以乐氏液灌流之，在肺表面可用针头散在性穿孔7 ～ 9 个，并调节灌流速度，使每分钟液体流出量约25 ml( 可计滴数) 。待灌流量恒定后，可将0. 5 ml 药物注入套管顶端的橡皮管内。灌流量恒定后，注入0. 01%组胺溶液( 10 mg /ml) 0.