研究OATP1B1 基因多态性与抗结核药物肝损害的关联.docVIP

研究OATP1B1 基因多态性与抗结核药物肝损害的关联 　　结核病是一种严重危害全民健康的慢性传染疾病，尤其是在非洲、?东南亚和西太平洋地区，每年导致近200 万人死亡。目前我国结核病年发病人数约为130 万，死亡人数约13 万，虽然结核病是一种古老的疾病，但其死亡率超过其他传染病死亡人数的总和。因此，结核病是我国重点控制的重大疾病之一。但抗结核药长期服用所导致的药物性肝损害(抗结核药物所致的肝损伤， antituberculosis drug inducedhepatotoxicity，ATDIH)，是结核病治疗过程中的最常见难题。抗结核药物致肝损害发生率为2%～28%，其传统的危险因素包括高龄、女性、饮酒、肝脏疾病的存在、代谢酶的遗传多态性、合并感染HBV、HCV，HIV 病毒等。目前的研究发现药物导致的肝损害是一个涉及多基因、多靶点的过程，肝脏的某些相关转运蛋白在其中亦发挥重要作用。研究表明，药物转运体的功能发生变化，药物在体内的血药浓度、清除过程等均会受到影响。有机阴离子转运蛋白(organic anion transporting polypeptide 1B1，OATP1B1)是肝脏重要转运蛋白之一，它能从血液中摄取多种物质进入肝细胞。近年来发现OATP1B1 的遗传变异对药物的疗效和毒副作用影响很大，其多态性对药物蛋白转运活性影响较为显著。OATP1B1 388Agt;G、521Tgt;C 位点在亚洲人群中存在比率较高，且均位于外显子上，对蛋白的转运功能影响较大。OATP1B1 是利福平等药物转运入肝脏的重要转运蛋白，目前针对OATP1B1 基因型和ATDIH 之间的关系研究尚少[9]。因此本研究将以中国重庆地区人群为研究对象，探讨OATP1B1 基因SNP与抗结核药物导致肝损害发生的相关性，为ATDIH 的发生机制及早期诊断和治疗提供依据。资料与方法一、病例来源2009 年至2012 年从第三军医大学西南医院、重庆市结防所和渝中区结防所收集服用抗结核药之后，导致肝损害患者的血液标本(2 ml)并存于-20 ℃，服用抗结核药后6 个月内未致肝损害的作为对照组。年龄18～75 岁之间，排除病毒感染所致肝损害、联合服用其他药物导致肝损害以及有任何肝脏疾病。 　　二、ATDIH 的诊断药物性肝损伤的诊断标准： 　　(1)单纯肝细胞损害：丙氨酸转氨酶(ALT)gt;2times;正常值高限(ULN)，碱性磷酸酶(ALP)正常或ALT/ALPge;5;(2)胆汁淤积性肝损害：ALPgt;2times;ULN，ALT 正常或ALT/ALPle;2 ;(3)混合性肝损害：ALT、ALP 均升高gt;2times;ULN，ALT/ALP 比值在2～5 之间。三、基因分型从全血中提取基因组DNA，使用全血DNA 提取试剂盒(omega，美国)，提取的DNA 存于-20 ℃。选取位于外显子5 上的388Agt;G 位点和外显子6 上的521Tgt;C 位点，使用Taqman 基因分型试剂盒388Agt;G(Assay ID:c，521Tgt;C(Assay ID：c_1901697)(ABI 公司)，在96 孔板中每孔加入7.5 mu;l反应体系，Universal PCR Master mix 3.75 mu;l、SNP kit(Probe/Primer mix)0.375 mu;l、H2O 2.375 mu;l 和患者的DNA1 mu;l(20～50 ng/mu;l)，然后在仪器上设置荧光定量PCR 反应条件(Roche Light cyclerreg; 480II)，95 ℃10 min，92 ℃ 15 s，60 ℃ 90 s(50 个循环)。反应结束后，保存数据，每种基因型随机挑选3 例标本送测序，以明确该分型方法。四、统计学分析运用Hardy-Weinberg 检验确认样本的群体代表性。基因多态性与疾病的风险分析用多因素Logistic回归分析。基因频率和Hardy-Weinberg 检验等使用SPSS 12.0 软件对数据进行统计分析。Plt;0.05 表示差异有统计学意义。 　　结 果 　　1. 收集的患者资料：共380 例结核病患者参与了这项研究，发生药物性肝损伤195 例，另随机选取未发生药物性肝损伤的185 例作为对照组。发生药物性肝损伤组年龄比对照组有增高，其余基本情况相似，无显著差别。 　　2. OATP1B1 突变位点的分布及与药物性肝损害的关系： 　　观察分析380 例患者SNP 等位基因频率的分布情况，其中rs2306283(388Agt;G，130Asn/Asp) G 等位基因频率为0.76，rs4149056(521T