2010版中国药典培训回答(第2部分微生物限度).doc

2010版中国药典培训回答（第2部分：微生物限度） 广东省药检所对《中国药典》2010版微生物专题培训班的有关问题解答答案。 1、微生物方法验证，要求菌株回收率≧70%，是否有上限要求？（如不得高于100%或者110%）。 答：没有上限。但一般不会高于100%，因为加进去的菌量是一样的，如果超过100%可看成是操作上的误差。按微生物的特性，如果不超过太多，是可以接受的，但没有具体上限。（本所控制在110%以内）。 2、在微生物方法验证时，霉菌、酵母菌计数验证只用黑曲霉及白色念珠菌做方法学验证，在操作培养过程中发现：在玫瑰红钠琼脂培养生长的白色念珠菌的形态太小与营养琼脂上培养的细菌的某些形态大小相同，这样如何判断营养琼脂上生长的菌落是否是白色念珠菌？为何这两种菌落形态相似？ 答：菌落形态相似不等于就是同一种菌。在验证时，营养琼脂的验证菌株为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，如果本底菌为0，则营养琼脂上长的菌应该不是白色念珠菌。要判断是否为白色念珠菌，应进行白色念珠菌的相应鉴定方法后才能确定。任何微生物都不可能只是从菌落就可以进行判断，只能判断为疑似，然后再做一系列相应的鉴定实验后才能进行判断。 3、生孢梭菌的适宜计数用培养基？（很多验证需对生孢梭菌进行计数） 答：最简便的方法是用硫乙醇酸盐流体培养基。该培养基上层为含氧层，适宜需氧菌生长，下层为厌氧层（下层高度最好7cm以上），适宜厌氧菌生长。在培养16~18小时这个时间进行观察，计数，超过20小时,由于繁殖量大，培养基将混浊，点计不清。或者是用哥伦比亚琼脂培养基，浇注后，置厌氧罐（袋）里，再置培养箱培养，计数。 4、微生物限度检查法中所用的培养基要进行适用性检查试验，请问这些培养基还需要做无菌检查试验吗？ 答：微生物限度检查，药典上没有特别说明对培养基作无菌性检查，但每次都要做阴性对照实验，阴性对照是检查整个检验系统是否被微生物污染，实际上也包括了培养基的无菌性检查。 5、微生物限度检查法中所用的培养基如：营养琼脂、EMB、Macl等培养基其分装容器需要预先灭菌吗？ 答：不用。只要是洁净的就行，因为分装后还要灭菌。 6、具有抑菌性的供试品，细菌、霉菌、都是用薄膜过滤法来检查的，那么沙门菌可以用常规法来检查吗？就是可以不经过过滤直接接种到营养肉汤中吗？ 答：这要看你验证的结果。如果通过验证，你的品种是对沙门菌有抑制作用，且用培养基稀释法不能消除其抑菌性，则就必需考虑用薄膜过滤法。 7、微生物限度检查中，稀释剂对照组，是在稀释液中加入50~100cfu的菌，还是把稀释液制成含量50~100cfu的浓度呢？ 答：是把稀释液制成含50~100cfu/ml菌的浓度。（在这里，我对上次讲课时关于稀释剂对照组操作的PPT进行纠正，对于离心 薄膜过滤法的稀释剂对照组的操作应该是：含50~100cfu/ml菌的稀释液 离心 取稀释液（与试验组同样取上层液） 过滤、冲洗 贴平板） 8、稀释级对照组:含50~100cfu/ml菌稀释液→离心→取供试液 稀释液过滤、冲洗→贴平板。这里需要加供试液吗？是否应为上述离心后的菌液？答：不需要取供试液，只取“上述离心后的菌液”。关于这一情况，我在第7题里已经作了说明。 9、当要做稀释剂对照组时，是否就是从制备供试品时就同时做一份不含供试品而是含菌50~100cfu的样品？等于按同一个方法制备一个供试品，五个含菌稀释液对照组？ 答：是的。 10、菌落计数是否需要将每天计数的数据登记在记录本上，是否可以只记录最终的数据？ 答：可以。每天计数的目的是预防菌落弥漫互相覆盖，干扰最终的点计。你可以用油性笔将每天点计的数记录在培养皿上，发报告时只要最终菌落数就行了。 11、若样品中有不溶物（如片剂中的辅料颗粒），经常会影响培养前期的结果，药典要求逐日计数，所以报告中会出现第二、三日菌落数小于第一日的现象，请问该如何向客户或监检机构解释这种结果？或者是否可以不计第一、二日菌落数，待辅料颗粒与菌落可以区分后再计数？ 答：报告书不需要显示第一、第二天的结果，只需报告最终结果。理由请见第9题答复。或者是在营养琼脂中加入TTC试剂（每100ml加入0.1%） 12、由于微生物检验的特殊性，对于样品的微生物限度检查计数数据是否可登记在表格内（此表格仅含样品名称、批号及检查结果）。之后再将检测结果移至详细记录中？ 答：原始记录应该只有1份。如果你说的详细记录是属于一般记录，是没有必要的，如果是指报告书，就应该没问题。这要看你自己订的SOP。 13、直接接种法培养后的菌落报告：原液230cfu,稀释10倍后 40cfu,请问按2010版药典的菌落数报告规则如何