论“少腹逐瘀汤”对寒凝血瘀型子宫内膜异位症的影响.docVIP

论“少腹逐瘀汤”对寒凝血瘀型子宫内膜异位症的影响 　　子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是指具有生长能力和功能的子宫内膜组织在子宫腔以外部位增殖和生长而引起的疾病。祖国医学并无EMs病名,根据其临床症状,可归属于中医“痛经”、“不孕”、“癥瘕”、“月经失调”、“血瘕”等范畴,其病机为寒客胞脉,血为寒凝,瘀阻血室,经血逆流腹腔,血不归经则成“离经之血”,或逆流于胞宫之外,瘀血阻滞下焦少腹,影响冲任的正常功能,致冲任失调,则见月经失调,腹痛,或难以摄精成孕。少腹逐瘀汤为寒凝血瘀证代表方剂,源于清代王清任的《医林改错》,是临床上治疗子宫内膜异位症的常用方剂。本实验从血液流变、性激素水平及受体分析少腹逐瘀汤治疗寒凝血瘀型EMs的作用机制。 　　1 材料与仪器 　　1.1 实验动物 清洁级雌性SD大鼠80只,体质量(200plusmn;20)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。合格证号 　　1.2 药物与试剂 取处方量少腹逐瘀汤组成药物(按当归9g、川芎3g、赤芍6g、蒲黄9g、肉桂3g、小茴香1.5g、五灵脂6g、没药3g、干姜3g、延胡索3g配方比例),上药共计500g,均购自北京同仁堂(哈尔滨药店),经黑龙江中医药大学生药教研室孙慧峰教授鉴定均为正品,水煎、过滤、浓缩至每1mL含生药8mg混悬液,于4℃冰箱保存备用。达那唑胶囊(江苏联环药业股份有限公司,批;E2、P 及SP免疫组织化学试剂盒购自北京博奥生物有限公司;试剂一抗(即用型鼠抗ER、PR 单克隆抗体),美国MaxinBiotech公司。 　　1.3 主要仪器 VictorTM X3酶标仪(PerkinElmer,美国);Acculab电子天平(赛多利斯艾科勒,德国);KDC-40低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司,中国);ThermoScientificForma995超低温冰箱超低温冰箱(赛默飞世尔科技,美国);LBYN6B型血液黏度仪(普利生,北京)。 　　2 方法 　　2.1 动物模型建立 大鼠阴道涂片、苏木素-伊红染色观察动情周期。每天定时观察阴道细胞涂片,选择动情期4~5d并连续有2个动情周期的大鼠,于动情周期行造模手术。手术采用经典自体移植手术法制备子宫内膜异位症大鼠模型。术后2w,将手术大鼠置于0~1℃冰水中10min,1次/d,连续2d,造成大鼠出现寒战、蜷缩少动、爪尾部紫暗等症状,建立寒凝血瘀模型子宫内膜异位症模型。术后4w,再次开腹观察移植物生长情况。手术成功的标志为:移植物体积增大,出现液体积聚,移植物被结缔组织或大网膜覆盖,并有血管形成,同时取移植物送病检证实内膜成活。 　　2.2 分组及给药方法 将模型复制成功的大鼠随机法分为5组:模型组、阳性对照组及少腹逐瘀汤低、中、高剂量组,每组10只;造模同时另取10只大鼠只行开腹手术,不进行子宫内膜移植,关腹,其余操作相同,作为假手术组。阳性对照组给予达那唑36mg/kg,少腹逐瘀汤低、中、高剂量组给予相当于生药量2.1、4.2、8.4g/(kg·d)少腹逐瘀汤药液的灌胃;1次/d,连续4w。 　　2.3 检测指标 　　2.3.1 血液流变学指标检测:分别取肝素抗凝后全血1mL、3000r/min离心10min分离的血浆1mL测定全血及血浆黏度;另取枸橼酸钠抗凝离心分离血浆,测定凝血4项,即纤维蛋白原(FIB)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)。 　　2.3.2 大鼠血清E2、P水平:采用ELISA法测定,具体操作按试剂盒说明书进行。 　　2.3.3 大鼠异位内膜组织中激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达测定:采用免疫组织化学法测定。采用定位定性方法,低倍镜下观察切片视野5个,并取平均值;同时,根据染色强度与范围作出每张切片的分级,并进行结果评定。依据双盲法要求,每张切片由2位病理医生Sl分别记数。 　　2.4 统计学处理 所有数据结果均采用