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谈凉血止痒合剂对变应性接触性皮炎小鼠IL -10 和IFN - γ 表达的影响 　　凉血止痒合剂是在本院皮肤科全国第三批名老中医学术经验继承工作指导老师、云南省名老中医刘复兴教授自创的皮内2 号方-荆芩汤的基础上研发的中草药复方制剂( 批号: 滇药制字〈Z 号，由云南省中医医院制剂室生产) 。该方主要由荆芥、黄芩、生地黄、牡丹皮、赤芍、紫草6 味药物组成，具有清热凉血、祛风止痒之功，临床主要用于治疗中医辨证属血热型的接触性皮炎、化妆品皮炎、特应性皮炎、光敏性皮炎等各种皮炎、湿疹及荨麻疹、药疹等多种变态反应性皮肤病。凉血止痒合剂临床疗效显著，具有明显抗炎止痒的作用，且无明显毒副作用，然而其抗炎的作用机理，通过何种途径发挥作用，都尚不明确。本研究通过建立2，4 - 二硝基氟苯( DNFB) 所致的小鼠耳廓肿胀模型，观察凉血止痒合剂对变应性接触性皮炎小鼠炎症细胞的抑制及对IL - 10 和IFN - gamma; 表达的影响，从组织病理及分子生物学方面阐述其作用机制，为其临床应用提供一定的理论及实验依据; 同时通过急性毒性实验，观察凉血止痒合剂的毒副作用。 　　1 材料与方法 　　1. 1 实验材料 　　1. 1. 1 动物昆明种小白鼠，清洁级，40 只，雌雄各半，体重18 - 22 g，合格证号: SCXK ( 滇) 2005 - 0008; 合格证号:0013106，由昆明医科大学实验动物中心提供。 　　1. 1. 2 药物凉血止痒合剂( 批号: 滇药制字〈Z号) ， 100mL/瓶，云南省中医医院院内制剂。醋酸地塞米松片( 0. 75mg /片，浙江仙琚制药股份公司，国药准字: 批号: 130644) 。0. 9% 氯化钠注射液( 国药准字: 250mL/瓶，贵州天地药业有限责任公司出品，批号 。 　　1. 2 主要试剂及仪器小鼠 　　IFN - gamma; ELISA 检测试剂盒、小鼠IL - 10 ELISA 检测试剂盒( 深圳晶美生物有限公司提供) ;2，4- 二硝基氟苯( DNFB) : 武汉福鑫化工有限公司，批号:201206012，分析纯。显微镜、酶标仪，电子天平，电动剃毛器等。 　　1. 3 给药剂量 　　1. 3. 1 凉血止痒合剂剂量凉血止痒合剂生药含量为79 g /100mL，经人和动物的等效剂量系数换算，标准体重小鼠给药剂量为20. 57 g /kg。 　　1. 3. 2 醋酸地塞米松片给药剂量小鼠给药剂量为0. 01 g /kg。1. 3. 3 急性毒性实验给药剂量凉血止痒合剂分别一次给药剂量为200mg /kg。 　　1. 3. 4 主要试剂配制以4 ∶ l 的丙酮: 橄榄油配成0. 5%、0. 2%两种浓度，现用现配。 　　2 实验方法 　　2. 1 凉血止痒合剂对2，4- 二硝基氟苯( DNFB) 所致小鼠耳廓肿胀的影响 　　2. 1. 1 实验动物分组、给药与造模健康昆明种小鼠，30只，雌雄各半，随机( 随机数字表法) 分成3 组，分别为模型组，阳性对照组( 醋酸地塞米松组) ，凉血止痒合剂组。除模型组给予等体积生理盐水外，阳性药组醋酸地塞米松组每日给药量为0. 01 g 体重，按照人和动物的等效剂量系数计算，标准体重小鼠给药剂量为20. 57 g /kg，共给药7d。实验前一天在腹部固定部位3 cm times; 3 cm 用剪刀及剃须刀去毛。实验第1、2天致敏期于去毛部位涂0. 5%DNFB，每天1 次，每次20 mu;L，第3、4、5 天不涂药，第一次致敏后的第6 天，用0. 2% DNFB 溶液20mu;l 涂抹在小鼠左耳两面进行免疫攻击。右耳单涂丙酮∶ 橄榄油( 4∶ 1) 溶剂作为对照; 涂耳24 h 后处死，沿耳廓基线剪下两耳。 　　2. 1. 2 观察指标 　　2. 1. 2. 1 病理变化及炎症细胞计数处死小鼠后，耳部皮损组织用4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE 常规染色，光学显微镜下观察各组病理变化，并用网型目镜测微尺计数单位面积真皮层最密集炎细胞浸润区的多形核细胞及单一核细胞数( 个/mm2 ) 。 　　2. 1. 2. 2 检测血清IL - 10、IFN - gamma; 水平实验结束后，摘除小鼠眼球，眼眶内取血，抗凝血在4℃ 下3000 r /min 离心30 min，获取血浆，利用ELISA 检测血浆中IL - 10、IFN - gamma; 的浓度。 　　2. 2 急性毒性试验 　　2. 2. 1 目的观察凉血止痒合剂的毒副作用。 　　2. 2. 2 方法取18 ～ 22 g 小鼠2