谈从青蒿素中提取的多糖通过引发细胞凋亡的抗肿瘤作用与肝细胞瘤免疫调节作用.docVIP

谈从青蒿素中提取的多糖通过引发细胞凋亡的抗肿瘤作用与肝细胞瘤免疫调节作用 　　癌症以其高发病率与死亡率，一直以来都是人类历史上的主要死亡原因之一。对于癌症的包括放射治疗在内的常规药物治疗以及外科治疗都延长了恶性肿瘤患者的生存时间。从青蒿素中提取的多糖( HQG) 是常用的活性提取物，可能在抗癌效果中起到重要作用。在本文中，我们首先提取了HQG，然后研究了多糖在肝癌细胞以及患癌症小白鼠体内中的特征。试验结果表明HQG 通过引发细胞凋亡与促进免疫调节作用发挥着抗肝癌效果，现介绍如下。 　　HQG 的制备与细胞培养HQG 的制备: 在80℃用乙醇溶液提取3 次，时间为3 小时。使用3000x 离心分离10 分钟之后，将水提取物在60℃真空环境下进行浓缩，然后放入3 倍体积的乙醇溶液中，在4℃环境下放置一晚上进行析出处理。提取水中类似凝胶的沉淀物，用蒸馏水进行透析。将不可透析的部分在- 20℃下冷冻。将冷冻-解冻过程重复10次以后，冻干上层清液，获得粗多糖成分。细胞培养: 将细胞保存在RPMI 1640 介质与10%( v /v) 胎牛血清， 100unit /ml 盘尼西林( 青霉素) ， 100unit /ml 链霉素的混合液中，并放置在37℃，CO2 浓度为5% 的潮湿大气环境中进行培养。当细胞合流达到80% ～ 90% 时，应每天更换细胞培养介质。 　　小白鼠脾脏淋巴细胞制备、染色制备: 将小白鼠进行解剖，得到新鲜的脾脏，将脾脏放置在10% FCS 与RPMI1640 介质的混合液中进行培养。将脾脏磨碎，然后用消毒处理过的注射器将其放入200-尼龙网上，使用500xg 离心分离机进行离心分离15 分钟。倒掉上层清液后，将脾脏淋巴细胞用5mlpH7. 2 的Tris-NH4Cl 溶液进行再悬浮处理，然后培养10 分钟。使用RPMI 1640 介质清洗两次后，将细胞放置在10%FCS 与RPMI 1640 介质的混合液中进行培养，最终使细胞浓度达到1 times; 107 个/ml。染色: 从小白鼠的眼球中提取血液样本，放在微量离心管中以500xg 的参数离心处理15 分钟，制备小白鼠脾脏淋巴细胞。将上层清液倒掉后，将500mu;l 预热浓度为4%的多聚甲醛与PBS 混合液加入每只离心管中在室温下对细胞进行悬浮处理5分钟。然后将3ml 冰冷的染色液缓冲剂加入培养溶液中，在4℃的温度下放置5 分钟，然后以200xg 的参数离心处理10 分钟，去除上层清液。 　　HQG 治疗抑制肿瘤生长 　　为了研究HQG 的抗肿瘤效应，向小白鼠体内注入肝癌H22 细胞，然后通过填喂法使用不同剂量的HQG 对小白鼠进行治疗。提取由注射的H22 细胞引发的肿瘤，并进行称重。使用最终成分为12. 5mg /kg 的HQG 进行治疗的小白鼠，其注射入体内的肿瘤细胞部分被抑制，只有六只小白鼠长出了肿瘤HQG 具有剂量依赖性的肿瘤生长抑制效应。 　　HQG 治疗引发癌症细胞凋亡 　　肿瘤细胞凋亡是抑制肿瘤生长的一般机理。为了证实HQG 引发细胞凋亡的机理，我们通过JC-1 染色法对未使用HQG 处理的7402 细胞中的线粒体膜电位的变化进行了检测。在未使用HQG 处理的7402 细胞中，可以很明显地观察到呈现红色荧光的J-聚合物。然而，使用HQG 处理的7402 细胞中发现了大量绿色荧光的J-聚合物，这说明由于HQG 的作用线粒体膜电位降低。这些试验结果综合起来表明HQG 引发了活体内与活体外的细胞凋亡。 　　HQG 治疗促进淋巴细胞的免疫调节作用 　　为了检测HQG 在抗癌效应中的免疫调节功能，我们首先在制备好的患肿瘤小白鼠脾脏淋巴细胞内通过流式细胞技术进行了CD4 + 与CD8 + T-淋巴细胞亚群检测。与未使用HQG 处理的患肿瘤小白鼠对照试验组相比，使用HQG 处理的患肿瘤小白鼠CD4 + T 淋巴细胞的数量明显增加，这说明HQG 有效地促进了患肿瘤小白鼠体内的免疫调节作用。 nKBwA 　　影响HQG 的抗癌效果的免疫调节途径 　　从本质上讲，肿瘤的发生是由于人体免疫防御系统的衰减，使癌细胞逃离了T细胞的控制。因此，试剂对免疫调节的促进作用将会有助于癌症免疫疗法中的癌细胞彻底消除。HQG 治疗对小白鼠的免疫调节作用有两部分作用。第一，使用HQG对患肿瘤小白鼠进行处理造成了CD4 + 与CD8 + T-淋巴细胞亚群的显著增加。第二， IFN-gamma; 与IL-4 的产生分别对Th1 型细胞与Th2 型细胞的调节免疫作用具有促进作用，含有IFN-gamma; 与IL-4 分泌物的细胞百分率的增加说明了HQG 所产生的不同的免疫刺激路径。综合考虑而言，HQG 的抗癌效果可能是由于不同的免疫调节途径结合引起的。 　　总之，本文中我们证实了HQG 通过