实验四+高等植物光合色素含量的测定研究报告.ppt

实验目的 掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。 实验原理 混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相重叠，仍然可以根据Lambert-Beer定律（A = k L C）求出各组分含量。Lambert定律：A = k L；Beer定律A = k C。叶绿素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分别为663nm、645nm，由此得出：见推导过程 Ca = 12.7 A663 – 2.69 A645 ；Cb = 22.9 A645 – 4.68 A663 Ca+b = 8.02 A663 + 20.20 A645 实验仪器及药品 实验材料：植物叶片 A663 = Ca.ka1 + Cb.kb1 A645 = Cb.kb2 + Ca.ka2 分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。 k——比吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C)为1g/L(0.1%)，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测出的吸光度即为比吸收系数。故其单位为： ε——摩尔吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C)为1mol/L，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测出的吸光度即为摩尔吸收系数。故其单位为： 方法及步骤 方法一：快速测定法 由于叶绿素a、b在652nm处有共同吸收，k = 34.5 L g-1. cm-1。可直接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿素含量，最后浓度单位为mg/dm2 方法二: 分光光度计法 色素提取：将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干，准确称取已知Φ的叶圆片0.05g左右，加入少许CaCO3和石英砂及80%丙酮2ml，充分研磨，转入离心管中（离心机使用），再用5ml 80%丙酮洗研钵，转入离心管中，平衡，5000rpm离心10min，上清液定容至10ml备用。 测定：以1cm比色皿分别测定A663、A645。使A控制在0.1 ~ 0.8之间。 结果与讨论 1、根据原理中计算出三类色素的浓度（mg / L）。2、根据公式 分别计算出各种植物叶片色素含量。 思考题 1、一般正常的植物叶片，Chla / Chlb = 3 / 1，你所测定的结果符合此比例吗？为什么？ 2、两种测定方法含量有何不同？为什么？ 3、怎样把方法一中的叶绿素含量mg/dm2转换为方法二中的mg / g FW ？怎样测定不同形态的植物叶片的叶面积？ 附1.叶面积的计算 选取单位面积重量是一个常数的打印纸如A4或16K。一般A4打印纸为70~105GSM（g/m2）。 用铅笔轻轻地沿着叶缘在A4纸上划线。 用剪刀沿着叶缘剪下A4纸。 称所剪下的A4纸的重量W (g)。 计算： 附2.高速冷冻离心机的使用方法 * * 实验四高等植物光合色素含量测定 实验背景 K652 = 34.5 由于k是一个常数，而A可以通过 返回 Chl content = (mg.g-1FW) *