遗传实验参考 果蝇大实验三.pdfVIP

大实验三：同一染色体上的转基因果蝇的杂交重组和鉴定（周二组） 报告人：胡璞 生01 2010012345 同组成员：兰陆红、谢雨辰、郑世喜、潘新蕾 日期：2012.5.29 1 实验目的与原理 1.1 实验目的： 老师提供给我们的果蝇品系分别含有转入的基因A 和基因B，我们需要通过重组交换 将这两个基因整合到同一品系果蝇的同一条染色体上，得到可以稳定保存的品系 （balanced 或homozygous）。 1.2 果蝇的转基因原理： 转基因果蝇（transgenic fly）是将带有目的基因的质粒通过显微注射转入白眼果蝇 卵中，这些质粒上一般带有P 转座子序列（P elements are transposable pieces of DNA that randomly insert themselves into genomic DNA），使得目的基因可以插 入到果蝇染色体中。一般使用白眼果蝇的卵进行显微注射，质粒上带有的mini-white 基因（红眼）可以作为转基因成功的标记（marker），带有目的基因的果蝇将成为红 眼果蝇。mini-white 的表达量决定了果蝇眼睛红色的深浅，这与目的基因插入位置 和copy 数目有关（插入位置附近的染色体结构和启动子决定mini-white 表达量，纯 和果蝇比杂合果蝇表达量也高，有多个插入位点的比单个插入位点的表达量高，一般 情况下只有一个插入位点）。 实验提供几种转基因果蝇，由于受质粒大小的限制，一般一个转基因果蝇品系只能 转入一个目的基因，有时需要把不同目的基因整合到同一个果蝇品系中，研究两个 基因的功能及相互作用等。如果两个目的基因都插在不同果蝇品系的同一个染色体 上，可以通过遗传重组的方法得到重组型后代（眼睛颜色），重组型后代将在同一个 染色体上同时带有两个目的基因，并可以建立稳定保持的品系。例如有基因A 的转 基因果蝇系tA 和基因B 的转基因果蝇系tB，A 和B 分别插在tA 和tB 的三号染色体 上（t 表示transgenic），通过重组交换可以得到三号染色体上同时带有基因A 和基 因B 的转基因果蝇系tAB，将tAB 稳定保存即可。 1.3 平衡子的使用原理： 重组实验还需要带TM3 平衡子(balancer)的果蝇来辅助，带平衡子的果蝇相应染色 体不能发生重组，使得杂交过程和鉴定方法更为简单。 1.4 UAS-Gal4 系统的应用原理： 实验还需要应用到一个UAS-Gal4 系统的神经细胞的driver，为GMR-Gal4，进行重组 成功的鉴定。 GAL4/UAS 系统是目前果蝇中十分常用的实验系统（见下图说明）。该系统利用组织特 异性的启动子或增强子，将GAL4基因与启动子或增强子相连接,建立GAL4转基因系， 通过这种启动子以细胞和组织特异性的方式来控制GAL4 的表达。另外，将UAS 与靶 基因融合，建立带有UAS-靶基因的转基因系。在杂交后代中,特异性表达的 GAL4 能 以同样的方式调节UAS-靶基因的表达。 2 实验材料 2.1 转基因果蝇A/A： tA 是纯合体，A 为Tau 基因。 2.2 转基因果蝇B/Ser： tB 为纯合致死，B 基因带有GFP 基因，能自发绿色荧光，在荧光显微镜下可观察。 Ser 为翅膀缺刻的基因，是一个平衡子。 2.3 果蝇+/Sb balancer: Sb 为短刚毛、白眼基因（显性），是一个平衡子，纯合致死；而通过之前学长们的 实验报告，我们了解到+则是纯合致死的。 2.4 果蝇GMR-Gal4： tA 与GMR-Gal4 果蝇系进行杂交，其在GMR-Gal4 的驱动下，产生子代的成体果蝇眼 睛缺陷，表现