微波辅助过氧化氢催化氧化降解壳聚糖.doc

实验题目 微波辅助过氧化氢催化氧化降解壳聚糖 实验目的 在非均相体系中弱酸性条件下，双氧水氧化降解壳聚糖制备低分子量壳聚糖的过程 考察了双氧水用量、微波温度、时间等条件对壳聚糖降解的影响 实验原理 在弱酸性条件下非均相体系中，微波辅助双氧水催化氧化降解法是壳聚糖制备的一种高效的方法，通过正交试验得到了制备窄分子量低聚壳聚糖影响顺序为：反应温度H2O2 用量 反应时间。降解各条件对分布指数的影响顺序是：H2O2 用量反应温度反应时间。从分布指数角度考虑最优条件是2g壳聚糖，双氧水用量4mL,微波温度90℃和微波时间50 核磁共振波谱分析和红外光谱分析证明，低分子量壳聚糖的结构相对于壳聚糖原料并未发生变化。双氧水氧化降解壳聚糖的过程是β-1, 4糖苷键的断裂过程。 实验器材 实验仪器 仪器 型号 生产单位 双向磁力加热搅拌器 78-2 金坛市杰瑞尔电器有限公司 微波催化合成/萃取仪 XH100B 北京祥鹄科技有限公司 循环水式真空泵 SHZ-D（Ⅲ） 巩义市予华仪器有限责任公司 旋转蒸发器 RE52CS 上海亚荣生化仪器厂 恒温水浴锅 B-220 上海亚荣生化仪器厂 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9140A 上海一恒科学仪器有限公司 电子天平 BS110S 北京赛多利斯天平有限公司 荧光分光光度计 970CRT 上海精密科学仪器有限公司 超级恒温槽 NTT-2100 EYELA，日本 pH计 320-S 上海梅特勒-托利多仪器有限公司 高效液相色谱仪 P3000 自组装 色谱柱 G4000/6000 PWXL TSK-GEL 示差检测器 RI K-2301 KMAUER 实验步骤及实验现象 5.1 0.5%醋酸溶液的配制 用5mL吸量管取冰乙酸5mL，转移至1000mL容量瓶，定容，待用。 5.2 2mol/LKOH溶液的配制 用电子天平称取28.0000g氢氧化钾固体，倒入小烧杯中，加入适量蒸馏水使其溶解，边加边搅拌，待溶解后，将溶液转移至250mL容量瓶中，将烧杯洗涤2～3次，也转移至容量瓶，定容， 5.3 正交实验因素水平的确定 本实验采用正交试验法安排整个实验过程。正交试验法又叫正交试验设计法，它是用“正交表”来安排和分析多因素问题试验的一种数理统计方法。这种方法的优点是试验次数少，方法简单，使用方便，效率高，并且在将实验次数降至最低的情况下，不影响实验结果的准确性。 5.3.1 降解反应温度的选择 当温度低于50℃时，氧化降解壳聚糖的反应非常缓慢，水溶性壳聚糖的产率非常低，因此本实验反应温度下限选择为50℃。较高的反应温度有利于制备水溶性低聚糖，随着反应温度的升高，水溶性产物的收率大大增加，但是随着反应温度的升高，水溶性壳聚糖的颜色逐渐变深，当温度升至90℃时，水溶性低分子量壳聚糖固体的颜色已经是棕黄色。鉴于对低分子量壳聚糖的质量要求，反应温度不能太高，以免影响色泽。所以降解反应的最高温度在正交设计时以选择70~ 5.3.2 降解反应时间的选择 低分子量壳聚糖的制备要实现工业化生产，生产效率是一个不容忽视的因素，在不影响低分子量壳聚糖的产率的情况下，应该尽量缩短反应时间，所以选择降解反应时间的各水平为30分钟、50分钟、70分钟。 5.3.3 双氧水用量的选择 按照生产过程中成本最低化的原则，反应过程中应该使双氧水的用量最少。根据实验测定，H2O2的用量少于2mL时，壳聚糖反应率较低，不能满足本实验的要求，因此选择H2O2的用量为2mL、4mL、6mL。 表2.3 微波辅助H2O2催化氧化降解壳聚糖因素水平表 Table 2.3 The factors level of H2O2 catalytic degradate chitosan by microwave assistant 因素 1水平 2水平 3水平 H2O2/mL (A) 2 4 6 反应温度/℃ (B) 70 80 90 反应时间/min ?(C) 30 50 70 5.4 低聚合度壳聚糖的制备 制备窄分子量分布的低聚合度壳聚糖，实验步骤如下： （1）称取2.00g壳聚糖，加到三颈烧瓶内； （2）在三口烧瓶中加入配制好的0.5%的醋酸溶液，用磁力搅拌器搅拌约10分钟； （3）再往其中加入一定量的30%双氧水，搅拌约3分钟； （4）将溶液放入微波催化合成仪中进行微波处理，设置一定的参数，处理一定的时间后取出，冷却； （5）向冷却后的溶液中加入配制好的2mol/L的KOH溶液调节PH值至7.0； （6）抽滤，将滤液倒入大烧瓶内旋转蒸发浓缩至适量体积，加入乙醇，醇沉静置，抽滤，用乙醇洗涤大烧瓶2～3次，再加入乙醚洗涤，吸收水分，即得低聚壳聚糖。 数据处理 6.1 正交分析 L9(33)试验结果分析 实验号 H2O2