酶工程2016课稿.pptx

酶工程专题泰州职业技术学院 徐坤山 2017-4-10 1 酶的古典定义：酶是活细胞合成的具有催化活性的蛋白质，酶是生物催化剂。 核酶：是具有催化活性的核酸，核酶也是生物催化剂。 课堂讨论：有学者将酶定义为生物催化剂，包括具有催化功能的蛋白质和核酸。但是也有学者认为为了加以区别，就把具有催化功能的蛋白质定义为酶，而具有催化功能的核酸定义为核酶。你的观点是？ 酶的作用特点： 高效性 （高度的催化效能） 专一性 （对底物的选择性） 不稳定性（容易失活）? 2017-4-10 2 一、概述 酶工程：是酶学和工程学相互渗透结合、发展而形成的一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异催化性能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 酶工程的主要内容： 酶制剂的生产：如微生物酶的发酵和提取，动植物中酶的提取及鉴定技术等 酶分子修饰改造 酶的固定化、细胞的固定化 酶反应器的研制和应用 其中固定化酶技术是酶工程的核心。实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。? 2017-4-10 3 一、概述 二、酶的发酵生产 2017-4-10 4 商业用酶的来源： 植物：如淀粉酶、木瓜蛋白酶等 动物：如胰酶、凝乳酶、尿激酶等 微生物：酶工业化生产的主要来源。 微生物生长繁殖快、周期短、产量高 微生物培养方法简单、经济 微生物菌株种类多，酶的品种多 微生物高产产酶菌种培育相对容易 优良产酶菌种的标准 生产周期短，易培养 培养原料廉价易得 产酶性能稳定，产量高，不易变异退化、不易感染噬菌体 产生的酶容易分离纯化，最好产生的是胞外酶 不是致病菌，安全可靠。 2017-4-10 5 二、酶的发酵生产 常用的产酶菌： E.coli ：是应用最广泛的产酶菌。分泌胞内酶，经细胞破碎分离得到。在工业上用于生产谷氨酸脱羧酶、天门冬氨酸酶、青霉素酰化酶、β-半乳糖苷酶。枯草杆菌：主要用于生产α-淀粉酶、β-葡萄糖氧化酶、碱性磷酸脂酶。 曲酶（黑曲酶和黄曲酶）：主要生产糖化酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、氨基酰化酶和脂肪酶。 啤酒酵母：用于酿造啤酒、酒精、饮料、面包等 2017-4-10 6 二、酶的发酵生产 课堂讨论：有些生物学家热衷于研究极端环境下的微生物，其可能的意义是什么？ 酶的发酵生产工艺条件： 培养基：碳源、氮源、无机盐、生长因子、PH。 发酵工艺参数控制： 温度控制 通气与搅拌 PH控制 提高酶产量的措施 添加诱导物 控制阻遏物浓度 添加表面活性剂 添加产酶促进剂 2017-4-10 7 二、酶的发酵生产 课堂讨论：在有关菌种培养条件优化的研究方案中在培养基中加入吐温或EDTA，有何意义。 酶的分离纯化技术路线 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。 8 三、酶的分离纯化 三、酶的分离纯化 （一） 细胞破碎 许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 1）机械破碎 2）物理破碎 3）化学破碎 4）酶解破碎 JY92-II D超声波 细胞粉碎机 细胞破碎珠 高压细胞破碎机 DY89-I型 电动玻璃匀浆机 9 胞外酶不需要进行细胞破碎处理！ 细胞破碎要防止酶失活 采用缓冲体系：防PH大幅度变化而失活 添加保护剂：防止活性基团（活性中心）受影响 抑制蛋白酶的活性 其他保护措施：温度，PH，搅拌，光照，氧化等影响 10 （二）酶的抽提 提取方法 使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取 0.02～0.5M的盐溶液 用于提取在低浓度盐溶液中溶解度较大的酶 酸溶液提取 PH2～6的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性较好的酶 碱溶液提取 PH8～12的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且稳定性较好的酶 有机溶剂提取 可与水混溶的有机溶剂 用于提取那些与脂质结合牢固或含有较多非极性基团的酶 11 (三）沉淀分离 沉淀分离方法 分离原理 盐析沉淀法 不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同，在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀 等电点沉淀法 两性电解质在等电点时溶解度最低，不同的两性电解质有不同的等电点，通过调节溶液的pH值，使酶或杂质沉淀析出 有机溶剂沉淀法 酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出 复合沉淀法 在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来 12 四、 酶的固定化 （一）固定化酶的制备 1、固定化酶（immobilized enzyme）的定义: 指限制或固定于特定空间位置的酶。具体讲是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化