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选修3 专题1 基因工程 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 高频考点突破 命题视角剖析 即时达标训练 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 高频考点突破 命题视角剖析 即时达标训练 返回 * 2012年2月10日 基础自主梳理 一、DNA重组技术的基本工具 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)主要来源：原核生物。 (2)特点：能够识别DNA特定的___________，切开两个核苷酸之间的______________。 (3)DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式：____________和平末端。 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 一、 2．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)作用：将双链___________ “缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的__________。 (2)种类 DNA连接酶和DNA聚合酶之间的区别： 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒。 ②噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 DNA片段 磷酸二酯键 平末端 (2)质粒载体的特点 ①能够在细胞内自我复制。 ②具有一个或多个_______________，便于供外源DNA片段插入其中。 ③具有特殊的遗传标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的___________。 (2)获取目的基因的途径 ①从基因文库中获取目的基因 限制酶切割位点 结构基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体外____特定DNA片段的核酸合成技术。 b．条件：已知基因的核苷酸序列。 c．过程：目的基因受热形成单链DNA，与引物结合，在___________的作用下延伸形成DNA。 d．方式：指数扩增＝2n(n为扩增循环的次数) 复制 DNA聚合酶 ③人工合成法：若基因较小、核苷酸序列已知，可以人工合成。 2．基因表达载体的构建 (1)表达载体的组成：目的基因＋________＋终止子＋标记基因。 (2)表达载体的功能 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代。 ②使目的基因_______和发挥作用。 (3)启动子：位于基因的_____，它是___________识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 (4)终止子：位于基因的尾端，终止mRNA的转录。 (5)标记基因：鉴别受体细胞是否含有目的基因。 启动子 表达 首端 RNA聚合酶 3．将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持____________的过程。 (1)将目的基因导入植物细胞 方法：农杆菌转化法；_______枪法；花粉管通道法。 (2)将目的基因导入动物细胞 ①方法：_____注射技术。 ②操作程序：目的基因表达载体______―→取卵(受精卵)―→显微注射―→移植到雌性动物体内―→新性状的动物。 稳定和表达 基因 显微 提纯 (3)将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、多为_______、遗传物质少。 ②转化：用Ca2＋处理细胞―→感受态细胞―→表达载体与感受态细胞混合―→促感受态细胞吸收DNA分子。 单细胞 4．目的基因的检测与鉴定 (1)检测 a．检测转基因生物的染色体DNA上的目的基因。方法：采用______________技术， b．检测目的基因是否转录出了________。 c．检测目的基因是否翻译成________。 方法：抗原－抗体杂交技术。 (2)鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定等。 三、基因工程应用 四、蛋白质工程 1.概念 2原理 注意：比较其与基因工程区别 DNA分子杂交 mRNA 蛋白质 难点突破 二、 基因工程的基本工具 1、 注意：　限制酶与DNA连接酶的关系 （1）．构建基因表达载体(核心步骤) 2、基因工程的基本操作程序 （2）、将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞(或受精卵) 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 1．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是(　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基