第10章 DNA的生物合成.ppt

第 三 篇 基因信息的传递 中心法则(the central dogma) 第 十 章 DNA的生物合成(复制) DNA Biosynthesis (Replication) 复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。 第一节 复制的基本规律 Basic Rules of DNA Replication DNA复制的特征 半保留性（semi-conservative） 方向性 双向性 半不连续性（semi-discontinuous） 高保真性（highly fidelity） 一、半保留复制 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 DNA复制的几种可能方式 半保留复制的实验依据和意义 Meselson-Stahl的密度梯度实验 Matthew Messelson Franklin Stahl 于1958年所作的实验，证明了DNA复制的半保留性质。 半保留复制的意义 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。 遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。 二、 5′→3′方向性 DNA聚合酶只能催化3′→ 5′磷酸二酯键的生成，既5′-P与3′-OH生成磷酸二酯键，因此DNA新链的生成只能沿5′→3′方向进行。 三、双向复制 复制时，DNA从起始点向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 复制叉(replication fork) 复制叉 复制时双链打开，分开成两股，新链沿着张开的模板生成，复制中形成的这种Y字形的结构称为复制叉。 复制子（replicon） 复制子是从一个DNA复制起始点起始的DNA复制区域，独立完成复制的功能单位。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。 原核生物 基因组是环状DNA； 只有一个复制起始点； 原核生物是单复制子完成复制，也称为复制体。 真核生物 真核生物是线形DNA； 真核生物每个染色体有多个起始点； 是多复制子(multireplicon)的复制。 四、复制的半不连续性 顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 冈崎片段（Okazaki fragment） 1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术，观察到DNA复制中出现一些不连续的片段，将这些不连续的片段称为冈崎片段。 原核生物: 1000~2000个核苷酸 真核生物: 100~200个核苷酸 五、高保真性 DNA复制的精确度极高，在细菌中其误差只有10-8～10-10左右。 第二节 DNA复制的酶学 Zymology of DNA Replication 一、DNA聚合酶 全称是依赖DNA的DNA聚合酶（DNA-dependent DNA polymerase），简称DNA-pol。 （一）原核生物的DNA聚合酶 1、DNA聚合酶I (DNA-pol I) 第一个被发现，当时称为复制酶(replicase); 单肽链; 含量最多。 活性： 1. 5??3?聚合酶活性； 2. 5??3?核酸外切酶活性； 3. 3??5?核酸外切酶活性。 DNA-pol Ⅰ的3? ? 5?核酸外切酶活性 即时校读 3? ? 5?外切酶活性和5? ? 3?聚合酶活性协调作用，完成了DNA-pol Ⅰ的即时校读功能。 Klenow片段 小片段具有5? ? 3?外切酶活性。 大片段又称Klenow片段，具有5? ? 3?聚合酶活性和3? ? 5? 核酸外切酶活性，是实验室合成DNA、进行分子生物学研究常用的工具酶。 2、DNA-pol Ⅱ 具有5→3的聚合酶活性; 只是在无pol-Ⅰ及pol-Ⅲ的情况下暂时起作用; 对模板的特异性不高, 参与DNA损伤的应急状态修复(SOS修复)。 3、DNA-pol Ⅲ DNA pol III 的聚合酶活性远强于DNA pol I，因此是DNA复制的主要聚合酶。它是由10种亚基组成的不对称异源二聚体 。 DNA聚合酶Ⅲ全酶结构 2个核心酶（α、ε、θ） 1个?-复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 可滑动的DNA夹子（含1对?-亚基） ?、?、?亚基组成核心酶 ?亚基具有5’→3’聚合活性； “错配”实验可证实，DNA-p