植物组织培养.pptVIP

【实验目的】 熟悉植物组织培养流程 了解培养基的配制方法 掌握无菌操作技术 【实验原理】 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或 细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养 物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使 其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依 据是植物细胞具有全能性。 【实验材料及仪器】 实验材料：野生虎杖植株的幼芽、叶片、茎段 实验器材：高压灭菌锅，超净工作台，电子天 平，酒精灯， 三角瓶，镊子，剪刀， 烧杯 实验药品：MS培养基，蔗糖，琼脂，0.1%升 汞，NAA，6-BA，NaOH，HCl， CPPU，TDZ 【实验步骤】 MS培养基的配制 取1000ml烧杯，分别取各种成分的母液100ml， 加入烧杯，称取蔗糖30g，琼脂6.5g，按照需要的浓 度分别加入各种植物生长调节剂，加水至800ml。加 热使琼脂溶解，定容至1000ml，用10％NaOH调节 pH至5.6~5.8。 培养基的灭菌 将配好的培养基迅速分装至50ml三角瓶中，用 棉花塞好，用牛皮纸或报纸包扎。放入高压灭菌锅 中，121℃、灭菌20min。 植物材料的消毒 选取野生虎杖材料，用水洗净，用70％酒精浸泡15-30s，然后放入0.1％的升汞溶液中浸泡20min，进行材料消毒，然后用无菌水反复冲洗多次。 接种 将消毒好的外植体材料在超净工作台中用镊子接 种于已灭菌的培养基中，光照下进行培养。 【注意事项】 1、实验所使用的器材要严格灭菌，注意无菌操作，避免因 染菌导致实验失败； 2、配制贮存母液时，要计算好各种成分扩大倍数后逐次加入，在第一种成分完全溶解后再加入第二种成分，切忌“一锅煮”。有机成分配好后要装入棕色瓶中在冰箱内保存，其它三种母液可在常温下保存，但最多不能超过一个月； 3、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值； 4、材料消毒时不要在酒精中停留过长时间； 5、接种后进行培养时，为确保实验成功，可以首先进行7- 10d的暗培养，然后再进行光照培养。 * * 植物组织培养实验  1.MS培养基母液的配制 按照表1配制MS培养基母液 表1. MS基本培养基的配制 mg/L 1650 1900 440 170 370 mg/L(100×) 165000 190000 44000 17000 37000 大量元素 NH4NO3 KNO3 CaCl2·H2O KH2PO4 MgSO4·7H2O MS培养基 母液 成分 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 MnSO4·4H2O ZnSO4·4H2O H3BO3 KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O mg/L mg/L(100×) 微量元素 mg/L 2.0 0.4 0.5 0.5 100 mg/L(100×) 200 40 50 50 10000 有机物质 甘氨酸 硫胺素 烟酸 盐酸吡哆醇 肌醇 mg/L 37.25 27.85 mg/L(100×) 3725 2785 铁盐 Na2EDTA FeSO4·7H2O