第7章 蛋白质的分离纯化和表征.pptVIP

（一）根据化学组成测定最小分子量 （二）SDS－PAGE测定相对分子质量 蛋白质的分离纯化方法 （一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤 3凝胶过滤法测定相对分子质量 （二）利用溶解度差别的纯化方法 1.等电点沉淀 调整溶液pH 不同蛋白在各自 pI处依次沉淀 2.盐溶和盐析 （四）利用蛋白质选择性吸附的性质 羟磷石灰层析 疏水作用层析 （五）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法 （2）离子交换层析(ion exchange chromatography) 利用固定相球形介质表面活性基团经化学键合方法，将具有交换能力的离子基团固定在固定相上面，这些离子基团可以与流动相中离子发生可逆性离子交换反应而进行分离的方法，称之为离子交换层析。 第7章 蛋白质的分离纯化和表征 1、测定蛋白质中某一微量元素的含量 2、假设蛋白质中仅含一个铁原子 最低相对分子质量= 100* 55.8/铁的百分含量 蛋白质颗粒电泳时迁移率取决于： 所带电荷 分子量 分子形状 十二烷基磺酸钠 原态蛋白质 变性 ？ 磺酸基 极性亲水 烷基 亲油（蛋白质疏水区） 迁移率与电荷和形状无关，仅取决于相对分子质量 巯基乙醇破坏二硫键 蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加制品纯度或比活 1.前处理：因动/植物/细菌而异 2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶 利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开 半透膜为玻璃纸或纤维素材料 血液透析 小分子溶出 小分子被带出 透析机 透析液 加压 血液 2、密度梯度（区带）离心 60000~80000转/分 重力60万～80万倍 蛋白质混合样 凝凝胶法只适于球状蛋白分子测量 3、凝胶过滤 3.有机溶剂分级分离法 降低介电常数 争夺水化膜 离子交换层析 亲和色谱颗粒 具有极强的专一性