第三章基因组与DNA复制.ppt

一、染色体（Chromosome) 与基因组 染色体的结构和组成 原核生物(prokaryote) C值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量。 原核生物和真核生物基因组结构特点比较 ● 基因组很小，大多只有一条染色体 ● 结构简炼 ● 存在转录单元(trnascriptional operon) 多顺反子(polycistron) ● 有重叠基因（Sanger 发现） 基因内基因 部分重叠基因 一个碱基重叠 2、真核生物基因组结构特点 ●真核基因组结构庞大 3×109bp、染色质、核膜 ●单顺反子 ●基因不连续性 断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、 外显子(exon) ●非编码区较多 多于编码序列(9:1) ● 含有大量重复序列 沃森和克里克在发表DNA分子双螺旋结构的那篇著名短文的结尾处写道：“在提出碱基特异性配对的看法后，我们立即又提出了遗传进行复制的一种可能机理。” 你能从DNA分子的双螺旋结构，设想出DNA复制的方式可能有哪几种吗？ 对DNA复制后离心实验结果的推测 密度梯度离心法：用超离心机对分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。即：在一定离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。） DNA复制的实验证（1958 Meselson 和Stahl ）： 定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。 （二）DNA复制的酶学 ⒉ DNA复制所需要的原料 底物：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、 dCTP、dTTP) 模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA 引物：DNA的合成需要一小段RNA链作为引物 聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶，简称为DNA-pol； 其它酶和蛋白质因子：引物酶、解旋酶、SSB、拓扑异构酶等 3、DNA聚合酶及其特点: 以DNA为模板的DNA合成酶 ●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物 ●反应需要有模板的指导 ●反应需要有3?-OH存在 ●DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? 原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌） 真核生物中的DNA聚合酶 α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3‘-5’ 外切 - - + + + 酶活性 功能 若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用 DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。 例：大肠杆菌中的DNA旋转酶 解链酶（DNA helicase) 单链结合蛋白(SSBP)： （三）DNA的复制的生物过程 ??? DNA的复制有固定的起始点，一般从富含AT较多的地方开始复制。先是DNA解链酶将双链DNA解开成双链，然后单链结合蛋白结合上去，防止双链重新退火变成双链。同时，引发酶合成一段与DNA复制点碱基序列配对的RNA，提供OH基团，为合成作准备。 ⑵ 有9个蛋白和酶参与复制的起始 蛋白质 亚基数目 功 能 Dna A 1 识别起点序列,在起点特异性位置解开双链 Dna B 6 解开DNA双链 Dna C 1 帮助Dna B 结合于起点 HU 2 类组蛋白,DNA结合蛋白,促