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(二)复性 核酸的理化性质 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 影响DNA复性的因素 降温速率，负效应（热变性的DNA在缓慢冷却的条件下可以复性，称为退火－annealing） (三) 分子杂交（hybridization） 核酸的理化性质 在变性的DNA溶液中加入外源DNA单链分子或RNA单链分子（与原DNA具有序列互补性），去掉变性条件后复性形成双螺旋结构的过程。 核酸的理化性质 分子杂交的种类 Southern Blotting：检测DNA Northern Blotting：检测RNA 核酸的研究方法 核酸的分离纯化和定量测定 核酸的离心分析 核酸的凝胶电泳 核酸的测序 PCR DNA的化学合成 核酸的研究方法 核酸的分离纯化 要点： 利用各种核酸的特性选择合适的纯化方法（注意掌握原理）； 抑制核酸酶的作用，防止核酸的降解和变性。 核酸的研究方法 核酸含量的测定 紫外分光光度法 核酸的研究方法 A260=1 50 ?g/ml 双螺旋DNA 20 ?g/ml 寡核苷酸 40 ?g/ml 单链DNA/RNA 核酸的凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳分离核酸 并测定DNA分子量 核酸的研究方法 核酸测序 核酸的研究方法 双脱氧终止法测定DNA序列 DNA聚合酶链反应（PCR） PCR：体外扩增DNA的技术 核酸的研究方法 必备条件 核心反应（原理） 核心技术 核心酶 核酸的结构 核糖与碱基之间通过N-(?-)糖苷键相连，形成核苷； 核苷中的戊糖羟基被磷酸酯化，形成核苷酸，核苷与磷酸之间主要通过5’-磷酸酯键相连。 核酸的结构 嘧啶核苷 嘌呤核苷 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ (OH) 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ (OH) 构成DNA的核苷酸：5’－脱氧核苷酸 核酸的结构 构成RNA的核苷酸：5’－核苷酸 核酸的结构 二、核酸的共价结构 核酸（DNA与RNA）是核苷酸聚合成的生物大分子，无分支结构。 核酸的共价结构就是核酸的一级结构，通常指核酸的核苷酸序列。 核酸的结构 DNA与RNA均以3,5-磷酸二酯键连接核苷酸。 核酸的结构 DNA一级结构的特点 无分支的线形或环形链； DNA链很长，分子量很大，编码巨大的信息量； 真核生物与原核生物具有不同的特性 核酸的结构 RNA一级结构的特点 无分支的线形链； 不同种类具有不同结构： 核酸的结构 RNA种类 碱基组成 3端 5端 其他特点 原核mRNA 无修饰碱基 有一段非翻译区 有一段非翻译区 有多顺反子mRNA 真核mRNA 有修饰碱基 有poly(A) 有5端帽子 单顺反子 三、DNA的三维空间结构 二级结构：DNA的两条多聚核苷酸链间通过氢键形成的双螺旋（double helix）结构。 三级结构：DNA双链进一步折叠卷曲形成的构象。 四级结构：DNA与蛋白质的复合体结构 核酸的结构 ——DNA的二级结构 1953年，Watson和Crick根据Chargaff 规律和DNA钠盐纤维的X光衍射结果提出了DNA的双螺旋结构模型。 2.6.2 DNA双螺旋 Watson-Crick双螺旋结构模型 两条反向平行（一条5’→3’，另一条3’→5’）的多核苷酸链绕同一中心轴相互缠绕，形成右手双股螺旋。 核酸的结构 碱基位于双螺旋的内侧，磷酸与脱氧核糖在双螺旋外侧，构成DNA分子的骨架；外部亲水，内部疏水。 核酸的结构 碱基平面接近与纵轴垂直，糖环的平面接近与纵轴平行。 核酸的结构 双螺旋是一种有规律的结构 平均直径 2 nm 螺距 3.4 nm 每旋转一周的核苷酸数目 10 碱基堆积距离 0.34 nm 相邻核苷酸夹角 36o 2.0 nm 核酸的结构 大沟与小沟。 核酸的结构 两条链依靠碱基之间形成的氢键结合在一起。 碱基配对原则： A－T G－C 稳定双螺旋结构的因素 ①碱基堆积力（base-stacking interactions） 疏水作用＋范德华力 ②碱基配对的氢键。GC含量越多，双螺旋越稳定。 核酸的结构 核酸的结构 碱基在一条链上的排列顺序不受任何影响；但是根据碱基配对原则，当一条链的序列被确定后，即可决定另一条互补链的序列。 DNA的三级结构 DNA在双螺旋的基础上通过扭曲和折叠形成的构象 包括不同二级结构单元间的相互作用、单链与二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征 超螺旋（supercoil）是DNA三级结构的主要形式 核酸的结构 核酸的结构 超螺旋的功能 超螺旋有助于DNA在细胞内的包装； 负超螺旋易于解链，有利于DNA的复制、重组和转录等过程的进行； 生物体内可通过调节DNA的拓扑结构来调节其功能。 DNA与蛋白质复合物的结构（四级结构） 核酸的结构 病毒