微生物的利用1课件.pptVIP

走近生物技术 传统生物技术与日常生活：酿酒、制作腐乳、泡菜…… 现代生物技术与人类生活：酶的固定化、PCR技术…… 本模块学习目的：走近生物技术，体验和运用生物技术、感受生物技术…… 第一部分 微生物的利用 实验1 大肠杆菌的培养和分离 一、基础知识 3、细菌的代谢类型 根据碳源不同，分为： 自养型：（如 硝化细菌） 异养型：绝大多数细菌 根据对氧气的需求不同，分为： 需氧型： 厌氧型：如 乳酸菌 兼性厌氧型：如 大肠杆菌、酵母菌 4、细菌与人类的关系 例：大肠杆菌 益：在肠道内对人无害；是基因工程中的工具 害：可能引发疾病 5、菌落 2、培养基的营养成分 （一）扩大培养：将菌种接种到液体培养基，加封口膜，37℃摇床振荡12h。 * 无细胞结构：病毒 有细胞结构 真核生物 （一）微生物类群 真菌：霉菌、酵母菌等 原生生物： 原核生物：细菌、蓝藻等 （二）细菌 1、结构 2、繁殖 （1）概念：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖，形成的肉眼可见，具有一定形态结构的子细胞群体。 （2）菌落特征是鉴别菌种的主要依据。 （三）培养基 培养基（培养液）是人们按照微生物对营养物质的不同需求配制而成的，专供其生长繁殖的营养基质。 （1）按物理状态： 固体培养基：常含有琼脂，用于菌种分离、鉴定菌落 液体培养基：可用于扩大培养、取样计数 （2）按功能： 选择培养基：分离以尿素为氮源的微生物等 鉴别培养基：伊红-美蓝培养基 1.培养基的类型 提供的主要营养 含量 培养基组分 定容至1000ml 5g 10g 5g 氢、氧元素 水 无机盐 NaCl 氮源、维生素 蛋白胨 碳源、磷酸盐、维生素 牛肉膏 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 （1）碳源：CO2、葡萄糖、牛肉膏等 （2）氮源：蛋白胨、尿素、NH4+等 （3）水： （4）无机盐： （5）特殊营养物质： 3、培养条件：pH、氧气、温度等 若培养基的组分有PO43-、粉状硫，试分析功能： 磷：参与合成核酸、磷脂、ATP等 硫：参与合成氨基酸、蛋白质等 细菌的最适pH一般是中性偏碱环境 同时是异养型微生物的能源 参与合成核酸、蛋白质等物质 某些氮源物质同时是碳源物质、能源 如 维生素 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。 （四）无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （1）消毒： 　　利用较温和的化学或物理方法，仅杀死物体表面或内部一部分致病微生物的过程。 1、消毒与灭菌： （2）灭菌： 　　使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。 煮沸消毒法： 巴氏消毒法：70-75℃下煮30min，如牛奶 化学药剂消毒法：用75%酒精对皮肤、桌面进行消毒 紫外线消毒法：超净工作台等 (1)消毒： 2、实验室常用的消毒与灭菌的方法 灼烧灭菌：如接种环（烧红） 、试管口、瓶口等 干热灭菌：如吸管、培养皿、金属用具 高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min。 (2)灭菌： 二、大肠杆菌培养和分离的基本操作程序 （一）用液体培养基 扩大培养 （二）制备固体培养基 （三）在固体培养基上 划线分离 （四）培养 （五）保存菌种 丢弃 （二）制备LB固体培养基（通用的细菌培养基） 1.培养基的配制：计算→称量→熔化(琼脂)→定容→调pH至7.5(→分装（不要使培养基沾在管口或瓶口上，三角瓶内的量不超过容积的一半）)→加封口膜/棉塞 （二）制备LB固体培养基（通用的细菌培养基） 2.灭菌：放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将5-8个培养皿用牛皮纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。 （二）制备LB固体培养基（通用的细菌培养基） 3.倒平板：待培养基冷却到50℃左右时(手放上还有些热)，先点燃酒精灯，再用酒精棉球擦拭手和桌面。在酒精灯附近倒平板。 （三）在固体培养基上 划线分离 菌液膜