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欢迎大家指导！ 2010年6月13日 固定化休哈塔假丝酵母细胞乙醇发酵的研究 姓名：*** 学号：******* 指导老师:*** 专业：生物工程 学院：生物与环境工程学院 一、研究背景 随着世界性的能源危机,我国能源短缺问题日益突出。传统的化石燃料等能源不仅资源日益枯竭，而且对环境造成了巨大的伤害。为了保证经济和社会的可持续发展,我们迫切需要开发新的可替代能源。在可能的生产可替代的清洁能源的方法中,以资源丰富的木质纤维素为原料依靠微生物发酵生产燃料乙醇的技术日益引人注目。 二、立题依据 木质纤维素是地球上最丰富、最廉价的的可再生能源。各种植物秸秆是大宗的农作物废料,其有机成分以纤维素、半纤维素为主，因此利用木质纤维素来发酵产生乙醇将给社会带来良好的经济效益，同时对环境保护起着重要的作用。 微生物能通过发酵木质纤维素的水解产物（主要为葡萄糖和木糖）生产酒精，并同时生成其他的附加产物。因此，该研究能利用廉价的可再生资源木质纤维素产生宝贵的能源资源-酒精。 固定化细胞发酵技术的优点 缩短了发酵周期； 大大增加了细胞浓度； 提高反应器单位体积的生物转化速率； 增强了菌体对外部条件（如温度和酸碱度）的抵抗能力； 由于细胞被固定,减少了细胞流失,使细胞可以长时间反复使用,并有利于产物分离等； 三、文献综述 1 前言 2 材料与方法 2.1 菌种 2.2 培养基的配制 2.3 固定化细胞的制备和增殖 2.4 驯化培养 3 单因素实验 3.1 初始木糖浓度对发酵效率的影响 3.2 发酵液pH对发酵效率的影响 3.3 发酵温度对发酵效率的影响 四、实验方法 实验流程： 菌种→活化培养→固定化细胞的制备→固化及稳定→固定化细胞的增殖→驯化培养→单因素实验 木糖含量测定： 3,5-二硝基水杨酸比色法 单因素实验的内容： 初始木糖浓度因素实验 不同初始木糖浓度发酵液的配制方法 按照下表向各个锥形瓶中添加相应的成分。 其中，木糖溶液的浓度为0.5g/mL，无糖发酵液为不含碳源的发酵培养液。 发酵培养 将锥形瓶置于30℃，转速为120rpm的摇床中培养96小时，每隔24小时取样一次，测定发酵液中剩余木糖含量。 发酵液pH因素实验 发酵液pH的调节： ①按要求配制好固定化细胞的发酵培养液后，灭菌后冷却，然后用酸碱滴定法调节发酵液的pH，使其达到实验所需要的值，即8个锥形瓶中的发酵液的pH值分别为3+0.5N（N=1，2，3，4，5，6，7，8）。 ②因为发酵过程会改变发酵液的pH值，因此每过12小时重新调节发酵液的pH。 发酵培养 将锥形瓶置于30℃，转速为120rpm的摇床中培养48小时后取样，测定发酵液中剩余木糖含量。 发酵温度因素实验 将装有相同发酵液的锥形瓶置于不同温度的摇床中发酵，摇床的转速相同。发酵48小时后取样，测定发酵液中剩余木糖含量。 五、实验结论 发酵液pH对发酵效率的影响 初始木糖浓度对木糖利用率的影响 温度对发酵效率的影响 固定化休哈塔假丝酵母细胞最佳发酵工艺 综合以上结论初步断定休哈塔假丝酵母的固定化细胞发酵木糖产生酒精的最佳条件是： ①发酵液中初始木糖浓度控制在70到80g/L； ②发酵液的pH维持在5左右； ③发酵温度控制在30℃。 在连续发酵的生产工艺中，应控制好发酵液的流速，及时补充新鲜发酵液和排出代谢废物，同时控制好发酵液的pH和发酵温度，使整个发酵过程在酵母细胞发酵能力最强的状态下进行，在降低工厂生产成本的同时提高产量，使效益最大化。 致谢 首先感谢*老师在实验过程中的悉心指导。季老师诲人不倦的精神给予我很大的鼓励，使我有信心把毕业设计做得更好。在实验过程中，我多次遇到困难，但是有了*老师的指点迷津，一切困难都迎刃而解，为我能顺利地完成实验节省了很多时间和精力，使我少走了很多弯路。 同时感谢生环院所有帮助过我的老师和同学，因为有了你们的支持，我的毕业论文才能更加顺利地完成。 * 固定化细胞发酵 的影响因素 初始木糖浓度 发酵液pH 发酵温度 本毕业论文所选的六个温度分别为： 20℃、24℃、26℃、30℃、34℃、37℃。 初始木糖浓度对发酵效率的影响 1 发酵液pH对发酵效率的影响 2 发酵温度对发酵效率的影响 3 初始木糖浓度对发酵效率的影响 1 发酵液pH对发酵效率的影响 2 发酵温度对发酵效率的影响 3 初始木糖浓度对发酵效率的影响 1 发酵液pH对发酵效率的影响 2 发酵温度对发酵效率的影响 3 初始木糖浓度对发酵效率的影响 1 发酵液pH对发酵效率的影响 2