第十一章抗生素类药物的分析.ppt

第十一章 抗生素类药物的分析 （Analysis of Antibiotics Drugs） 第一节 概 述 第二节 ?-内酰胺类抗生素 第三节 氨基糖苷类抗生素 第四节 四环素类抗生素 第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查 第一节 概 述 灵敏度高、需用量少 适用范围广－纯品、不纯品、已知的和新的 可一次测定同类型抗生素的总效价－无需分离纯化，与临床的应用要求一致 操作繁琐、费时费力 误差较大 培养时间长 四、抗生素的生产与杂质来源 （一）抗生素的生产主要采用两种方法： （1）生物合成（发酵）：生物包括微生物（真菌、放线菌、细菌等）、植物、动物。 （主要生产方法） （2）化学合成或半合成方法制取（少数生产方法） （二）抗生素杂质的主要来源： （1）生产过程中带入 （2）贮藏过程中产生 第二节 ?-内酰胺类抗生素 （?-Lactam Antibiotics） 一、化学结构的特点： 1、分子结构的母核由A环（?-内酰胺环）与B环（氢化噻唑环式氢化噻嗪环）骈合而成： 青霉素族（PC）的母核：6-氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic acid，简称6-APA）； 头孢菌素（CEP）族的母核：7-氨基头孢菌烷酸（7-aminocephalosporanic acid，简称7-ACA）。 β-内酰胺类抗生素结构示例： 理化性质 （1）酸性与溶解度； （2）旋光性； （3）紫外吸收光谱； （4）?-内酰胺环的不稳定性 （二）手性C （三）共轭体系 （四）β–内酰胺环 （二）光谱法 1．红外光谱（IR）吸收 3）异构体：  相对保留时间 1--被测物  2--标准物 异构体 相对保留时间 判断 B异构体 0.85 供试液谱图中A异构体的峰面积 A异构体 1.0 与A、B异构体峰面积和之比应为0.48~0.55。 示例1 ：头孢克洛HPLC测定法 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相：以KH2PO4溶液（取KH2PO4 6.8g，加水溶解并稀释成1000ml，用磷酸调节pH值至3.4）-乙腈（92：8）为流动相； 流速：1ml/min； 检测波长：254nm。 系统适用性试验：头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体的分离度应大于1.5。理论塔板数按头孢克洛峰计算应不低于1500。计算按外标法以峰面积计算。 示例2： 阿莫西林克拉维酸钾片 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相：磷酸盐缓冲液（取NaH2PO4 7.8g，加水溶解并稀释成900ml，用磷酸或10mol/L氢氧化钠调节pH值至4.4±0.1，加水稀释至1000ml）-甲醇（95：5）为流动相； 流速：0.7ml/min； 检测波长：220nm。 系统适用性试验：阿莫西林峰和克拉维酸峰的分离度应大于3.5。按外标法以峰面积分别计算供试品中阿莫西林和克拉维酸的含量。 生物样品中β-内酰胺类抗生素的分析有色谱法、微生物法、放射免疫法等，其中HPLC法因其专属、灵敏、检测手段多。 色谱条件：色谱柱YWG C18； 流动相：0.033mol/L磷酸缓冲液（pH7.2）-甲醇（85：15） 流速：1.0ml/min 紫外检测波长：229nm，进样量20μl。 血浆样品处理：取血浆置离心管中，加入内标（替硝唑溶液），再加入0.63mol/LHClO4溶液，混旋40s，离心，取上清液进样。 （二）碘量法 1、原理：利用青霉素或头孢菌素不消耗碘，而其降解产物消耗碘的性质，采用剩余碘量法测定，并以标准对照法计算含量。反应分为两步进行： 2、讨论 （1）CEP族药物与PC族一样，也按两步进行。 （2）反应第一步的水解反应按化学计算量完全反应的。 （3）反应第二步易受温度、pH值、反应时间等因素影响。 （4）为了消除因条件控制差异而导致的实验误差，通常采用相应的标准品作平行对照实验。 （5）PC族的降解产物等杂质也会消耗碘而影响测定结果，可以用未经水解的供试品溶液作空白实验，从而校正其影响。 3．测定方法： 精密称取本品适量——加水溶解后，置碘瓶——加NaOH溶液，放置，再加1mol/L盐酸溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，摇匀，20-25℃暗处放置20min，用Na2S2O3滴定液