细胞工程制药课稿.ppt

细胞工程制药 细胞工程（Cell engineering or cytotechnology） 以细胞为单位，应用细胞生物学、遗传学、发育生物学和分子生物学等理论与方法，按人们的设计和需要，改变细胞的某些遗传特性，达到改良或产生新品种的目的，或使细胞增加/重新获得产生特定产物的能力，在离体条件下进行大量培养、增殖，提取目的产品的一门综合性生物工程技术。 概述 在细胞水平进行操作 细胞融合 细胞移植 染色体改造 细胞、组织培养 分为植物细胞工程和动物细胞工程 动 物 细 胞 制 药 一、发展史 开始于疫苗的生产 1920～1925年 流感、伤寒、霍乱疫苗 1951年 Earle研究出能在体外培养的动物细胞培养液—标志着近代动物细胞培养技术的开端 1975年 Kohler和Milstein 建立了小鼠淋巴细胞杂交瘤技术—推动蓬勃发展 基因重组技术和杂交瘤技术—划时代意义 基因重组技术 1）显微注射法：利用纤维操作技术系统和显微注射技术将外源基因直接注入实验动物的受精卵原核，使外源基因整合到动物基因组，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。 基因重组技术 杂交瘤技术（hybridoma technique） 即淋巴细胞杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术。它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）（1975）证明，骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体，这种技术通称为杂交瘤技术。这一技术的基础是细胞融合技术。骨髓瘤细胞在体外可以连续传代，而脾细胞是终末细胞，不能在体外繁殖。如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体或因子的淋巴细胞融合，则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性，又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力，同时也克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点，融合的细胞称为淋巴细胞杂交瘤。 实验原理 二、 动物细胞的形态和生理特点 1.动物细胞的形态 适应功能,形态各异 离体培养细胞分三类： 贴壁细胞 悬浮细胞 兼性贴壁细胞 动物细胞的结构 动物细胞的形态和生理特点 1、贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型 第二节 动物细胞的形态和生理特点 2、悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬 浮状态生长。如淋巴细胞。 3、兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢 细胞，小鼠L929细胞。 二、动物细胞的生理特点 1、细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M） G1期：4～6h，合成DNA聚合酶及RNA合成 S期：6～8h，DNA合成 G2期：2～5h，DNA量加倍, RNA合成 M期：0.5～1h，染色体分裂 细胞代数为细胞分裂次数 传代数表示细胞培养分种传代次数 细胞代数=传代数×分种数 / 2 X=(logN-logN0)÷log2 X：代数 N：培养最终细胞数 N0：培养起始细胞数 倍增时间=培养经过时间÷代数 第二节 动物细胞的形态和生理特点 2、细胞生长需贴附于基质，有接触抑制现象 电荷、钙、镁、贴附因子（胶原、纤维结合蛋白等） 接触抑制或密度依赖抑制 （转化异倍体后此现象消失） 第二节 动物细胞的形态和生理特点 3、正常二倍体细胞的生长寿命有限 原代培养 有限细胞系：种族、年龄 无限细胞系或连续细胞系：异倍体 第二节 动物细胞的形态和生理特点 4、动物细胞对周围环境十分敏感 理化因素如：渗透压、pH、离子浓度、剪切力、微量元素等。 5、动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。 6、动物细胞蛋白质的合成途径和修饰 功能与细菌不同 动物细胞蛋白质的合成部位： 游离核糖体 粗面内质网的核糖体 游离核糖体合成蛋白质用于细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋白质是分泌的和膜中的整合蛋白，多为糖蛋白。 动物细胞生产药物 优点：分泌胞外、纯化方便、翻译 后修饰糖基化，与天然产品一致。 缺点：培养条件高、成本贵、产量低。 三、生产用动物细胞的要求与获得 一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系