细胞融合单克隆抗体课稿.ppt

植物体细胞杂交过程示意图 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ） 具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ 　） B淋巴细胞 　 B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞 【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ） A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 3.为何要进行两次筛选？ 4.如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。专一抗体检验呈阳性。 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 1.本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 （1）作为诊断试剂——最广泛用途 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等疾病） （二）单克隆抗体的应用 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度高，在妊娠第8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了10天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。 （2）用于治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。这样既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。 “生物导弹”＝抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素 单克隆抗体导向，药物为弹头 利用单克隆抗体的特异性 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒 一个新细胞－－杂交瘤细胞 一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高，并可大量制备的优势 获得杂种细胞、制备单克隆抗体 除应用植物 细胞杂交手 段外，还有 灭活病毒 用胰蛋白酶 使细胞分散 后诱导细胞 融合 细胞膜的 流动性 动物细 胞融合 克服远源 杂交不亲 和，获得 杂种植株 离心、电刺 激、振动、 聚乙二醇 纤维素酶、 果胶酶去除 细胞壁后诱 导原生质体 融合 细胞膜的 流动性；细胞全能性 植物体 细胞杂交 用途 诱导手段 细胞融合的方法 细胞融合的原理 比较项目 比较动、植物细胞杂交技术 基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的