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(一)培养基 1、概念:根据微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 ②按化学性质划分 ③按培养基用途划分 消毒——用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。 灭菌——使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 (1)消毒方法 (2)灭菌方法 1、配制培养基 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 2、纯化大肠杆菌 ①平板划线: 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 3、菌种培养 将接种后的培养基倒置放入37 ℃的恒温箱中培养24小时。 4、实验结果观察 观察不同的菌落,看颜色、菌落的形态等。 5、菌株的保存方法 ①临时保藏: 斜面培养基,4 ℃保存; ②长期保存: 甘油管藏法,-20 ℃冷冻箱中保存。 3、有关倒平板操作错误的是( ) A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C.将培养皿打开,培养皿盖倒放在桌面上 D.等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 * 专题2 微生物的培养与应用 选修1 生物技术实践 2、种类: ①按物理性质划分 主要用于工业生产 否 液体培养基 主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等 是(0.2%~0.5% 琼脂) 半固体 培养基 用于微生物的分离、计数等 是(0.5%~1%琼脂) 固体培养基 用途 是否含凝固剂 种类 考点1:微生物的培养与应用 常用于微生物的分类、鉴定 是 合成培养基 常用于工业生产 否 天然培养基 用途 化学成分是否明确 种类 伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌 培养基中加入某种指示剂或化学药品 依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应,产生明显的特征变化而设计 鉴别不同种类微生物 鉴别培养基 加入青霉素分离得到酵母菌等 培养基中加入某种化学物质 依据某些微生物对某些物质的抗性而设计 从众多微生物中分离所需的微生物 选择培养基 例子 制备方法 原理 用途 种类 水、碳源、氮源、生长因子、无机盐。 3、营养要求 (二)无菌技术 接种室、超净工作台 30W紫外灯照射30 min 紫外线消毒 用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒,空气、手术器械或玻璃器皿等 用体积75%的乙醇、碘酒涂抹、氯气消毒水源 化学药剂消毒 牛奶、啤酒、果酱、酱油等不宜进行高温灭菌的液体 70~75 ℃煮30 min或80 ℃煮15 min 巴氏消毒法 日常生活的用品 100 ℃煮沸5~6 min 煮沸法 应用范围 主要方法 消毒种类 培养基及多种器材、物品 121 ℃维持15~30 min 高压蒸汽 灭菌 玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品 电热鼓风干燥箱160~170 ℃加热1~2h 干热灭菌 接种工具如接种环、接种针或其他金属用具,接种过程中试管口等 酒精灯火焰灼烧 灼烧灭菌 应用范围 主要方法 消毒种类 1、甲、乙、丙是三种微生物,下表①、②、③是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在③中正常生长繁殖;甲能在①中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在②中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是: + + + + + + + + ③ + + + + - + + + ② + + + - + + + + ① CaCI2 0.5g MgSO4 9.25g H2O 100mL (NH)2SO4 0.4g 蔗糖 10g FeSO4 0.5g K2HPO4 4g 粉状硫 10g A、甲乙丙都是异养微生物 B 、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物 C 2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是: ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A、⑤③②①④⑥ B、①②③④⑤⑥ C、⑥②③④①⑤ D、③④②①⑥⑤ A (三)实验操作 ②稀释涂布平板: 将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面。当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的标准菌落。 ①平板划线: 梯度稀释 ②稀释涂布平板: 涂布平板 解析:整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵,因此,灭过菌的培养皿放在火焰旁,打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰,培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,不能将培养皿完全打开,等待平板冷却凝固后需要倒过来放置。 C 4、有关稀释涂布平板法,叙述错误的是(
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