血液凝固.ppt

血型鉴定和交叉配血实验 实验目的 学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 观察红细胞凝集现象。 实验原理-血型鉴定 ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素（Immunoglobuli M ）。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型（表型）。 实验原理-交叉配血 同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 交叉配血既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中， 是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应在 37℃下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。 交叉配血 交叉配血中红细胞悬液和血清的制备方法： 静脉采血3ml，取下针头，将其中的0.4ml注入已加入106mmol/L枸橼酸钠抗凝剂0.1ml的试管中（血液与抗凝剂的比例为4:1），混匀，待用。剩余血液加入另一支试管中，使其自然凝固。分离血清备用。洗涤红细胞：取抗凝血一份，加8－10倍量的生理盐水，颠倒混匀后，1000r/min离心5分钟，弃去上清液，再加入8－10倍量的生理盐水，颠倒混匀后，1000r/min离心5分钟，如此反复三次。最后弃去上清液后即得压积红细胞。配制5%红细胞悬液：取压积红细胞1滴，加2ml生理盐水，颠倒混匀即可。洗涤红细胞的目的：洗脱红细胞表面上残留的血浆蛋白，以免造成血型不符的假象 实验对象、药品和仪器 人 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜，消毒牙签，5ml注射器及针头，生理盐水，碘酒棉球，滴管，小试管。 A、B型标准血清 实验方法和步骤 1. ABO血型的鉴定? 取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。 在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。 75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血，分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2?min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。 根据凝集现象的有无判断血型。 实验方法和步骤 ABO血型的鉴定? A端 B端 A型标准血清 B型标准血清 抗B凝集素 抗A凝集素 黄色 蓝色 A端 B端 A端检出 B端检出 判断 未凝集 凝集 A凝集原 A型 凝集 未凝集 B凝集原 B型 凝集 凝集 B凝集原 A凝集原 AB型 未凝集 未凝集 O型 实验方法和步骤 2.交叉配血实验 ? 分别对供血者和受血者消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液1-2滴，加入装有生理盐水约1?ml的小试管中，即为2-5%的红细胞悬浮液。加盖备用。 取双凹玻片一块，在两端分别标上供血者和受血者的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。? 将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置10～30??min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。交叉配血反应结果判定见p74表 注意事项 指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针， 不能混用。使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。 消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜过少，以免影响观察。 采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。 在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混。  实验结果和讨论 为什么在配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？? 出血时间和凝血时间的测定 实验目的 ?学习出血时间和凝血时间的测定方法 熟悉测定两时间的意义 实验原理-出血时间 出血时间就是指小血管受到破损后血液流出至小血管封闭自行停止出血所需的时间，有时又称止血时间。止血的发生主要与小血管的收缩封住出血口、血小板粘附、聚集和释放血小板活性物质等一系列生理反应过程有关。观察出血时间是检测毛细血管功能和血小板数量及功能状态是否正常的简便而有效的方法。正常人出血时间约为1～4?min，出血时间延长见于血小板数量减少或毛细血管功能缺损情况。 实验原理-凝血时间 血液流出血管后，受到刺激的血小板就会释放