HPLC常见故障问题解决课题.pdf

HPLC 常见常见故障故障问题问题解决解决汇总汇总 常见常见故障故障问题问题解决解决汇总汇总 宋学志 2008-6-11 晚 HPLC 用水来源 1 专门的纯水机或超纯水机； 2 去离子水重蒸； 3 二次或三次重蒸水； 4 采用类似家用的纯水机； 5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； 6 其它途径 以上的水除第1 项的水能用于梯度淋洗外，其余的水均难用于梯度淋洗。不管采用何种途径，配制流动相 应用新鲜水，水质越高放置时间越短。 理想的HPLC 用水应为 18.2M? 的超纯水，并通过0.22um 的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气 等。 最小检测限的计算方法 （以N2000 色谱工作站为例） CL=2*Nd*c*20/HV 注：Nd 基线噪声，单位：mV c 样品浓度 H 峰高，单位：mV （或AU ） V 进样体积 例： 如基线噪声为20 微伏即0.02mV，萘的甲醇标样溶液浓度为0.0001g/L，峰高145000 微伏即145mV，进 样体积为20 微升，即得： CL=2*0.02*0.0001*20/145*20=2.76e-8 即10 的负8 次方 对仪器进行维护时应该遵循的几条基本规则 1. 一次规则 当系统出了故障，你可以试探性地改变某些状态，一次可以改变一个参数。例如，限制色谱峰脱维的问题， 可以依次改变流动相，换保护柱，换分析柱等。做一些简单的改变步骤，也许就能解决问题。 2. 二次比较规则 在动手检修之前已经明确了故障所在，或者已经确定了解决故障的方案。换句话说，动手之前已经找对了 解决办法。例如，在进样过程中发现内标物的峰值变低了，可以重复进样看看重复性如何，如果是偶然变 低，是否是定量管里进了气泡。这个规则可用于考察系统改变后的情况。更换了流动向后在正式进样前可 以进两次标准品以检查保留时间的稳定情况和色谱峰的稳定性。在梯度洗脱中如果出现了多余的峰，可以 空载梯度洗脱一次（真的有问题吗？），用此规则可以避免不必要的改变，尽快确定纠正措施。 3. 取代规则 用好的部件换下可疑的部件，是查找故障的最好方法。如果你怀疑检测器引起了噪音，就换一个性能好的 检测器。如果故障被排除了，就说明换下的检测器有问题。这个规则应用的规模有大有小，可以从换整个 部件到换印刷线路板上的集成块。 4. 换 规则 这个规则和取代规则一起运用，好部件取代了可疑部件后情况并未得到改善，应重新换上原部件。这样做 的维修费用最小，也防止了用过的部件积压下来。这条规则仅适用于单一的故障。换回原则不适用于以下 的情况： （1） 在取下时新部件已损坏 （如泵密封垫圈）； （2 ） 部件价格低 （如柱内衬过滤片）； （3 ） 重新装上原部件要冒损坏的风险； （4 ） 定期更换的部件。 5. 参考条件规则 通常有两种参考条件：①标准参考条件；②试验参考条件。 标准参考条件也叫标准试验条件，是从一个系统到另一个系统，从一个实验室到另一个实验室都易于验证 的条件。用该条件所测得的数据有助于识别实际试验和系统间的问题。如果在某试验条件下系统压力升高， 而在标准条件下压力正常。这说明系统异常是由实验室的变化所引起的。下表列举了启用新色谱柱是的标 准试验条件，在使用过程中也可用此标准试验条件检查系统的情况。 流动相 甲醇/水（体积比=70/30 ） 色谱柱 C18 反相 流速 1mL/min 检测器 UV 254nm