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《动物转基因技术》结业论文 学号：20104081241 动物转基因技术研究新进展 学生姓名：赵剑辉 指导教师：潘求真 所在学院：生命科学技术学院 专 业：生物技术 中国·大庆 2013年 11月 动物转基因技术研究新进展 摘要：动物转基因的关键限制因素是制备效率和基因表达的精确调控。综述了近年发展的提高转基因效率的非定点整合转基因方法,如睾丸转基因法和卵巢转基因法；提高转基因精确性的定点整合转基因的基因打靶法；调控外源基因表达的时空表达和可控表达转基因策略；通过转基因对特定基因的进行表达时空和可逆的RNA干扰灵活精细调控。对这些新的转基因方法的优缺点进行了讨论,并探讨如何利用这些方法进行转基因动物的制备。 关键词：转基因方法；效率；时空表达；可控表达；RNA干扰 An Update on the Development of Techniques for Producing Transgenic Animals Abstract: Efficiency and specificity are key limiting factors on preparation of transgenic animals. This review describes the recentlydeveloped animal gene transfer techniques, including gene transfer into the testis and ovary for easily making nonsitespecificmethods? gene targeting in embryonic stem cells, somatic cells and primordial germ cells for site specific methods? and siteandtimespecificgene targeting and controlled expression of transferred genes.In addition, methods of utilizing newly developed RNA interference,combined with the above gene expression controlling techniques, to produce transgenic animals to pGEXPRandpETPRSand reversibly knock down specific genes are also discussed. The merits and disadvantages for each method are also discussed, aswell as potentials of using these methods to develop transgenic animals for breeding of new animal lines, studying of disease modelsand production of therapeutic medicines. Keyword:gene transfer method? efficiency? spatiotemporalexpression? inducible expression? RNA interference 目 录 前言 1 1性腺转基因方法 1 2定点制作转基因动物方法 1 2.1胚胎肝细胞（ES细胞）基因打靶方法 1 2.2对体细胞进行基因打靶 1 2.3对原始生殖细胞（PGC）进行基因打靶 2 3外源目的基因的表达和调控 2 3.1目的基因的时空表达 2 3.2目的基因的可控表达 3 4插入干扰基因进行RNA干扰（RNAi）调控 5 5展望 6 参考文献 6 前言 动物转基因技术是将外源基因移入动物细胞并整合到基因组中，从而使其得以表达。自从Bergand Eckardt (1970)创立DNA重组技术、Ja enisch andMintz (1974) 首次利用反转录病毒感染胚胎的方法进行动物转基因以来，动物转基因技术得到不断完善和发展。利用逆转录病毒介导、显 微注射、电穿孔、脂质体介导、精 子载体等转基因方法，制备了小鼠、大鼠、兔 、猪 、绵 羊、山 羊、鸡 、蛙 、鱼类等多种转基因动物。而近几年来动物转基因的方法和转基因的内涵又有了新进展,包括通过简便的性腺注射介导的转基因、转入RNA干扰基因、基因打靶结合克隆的定点整合转基因和因的条件表达转基因技术等，本文对这些新近发展的