王雪娇核酸的提取.docVIP

核糖核酸的提取分离 李玉辉 11生化制药 摘要：核糖核酸(RNA) 是一种遗传物质，因为分子由核糖核苷酸组成而得名。参与细胞蛋白质合成和免疫调节等生理活动。RNA及其降解物在药物开发、保健品和食品添加剂等领域具有良好的应用前景。本课题对啤酒废酵母的综合利用进行了研究,拟采用新工艺从啤酒废酵母中提取核糖核酸。在啤酒酵母中RNA 含量可高达6%～8%, 至今以废啤酒酵母提取RNA 作为生产RNA 的有效途径被广泛采用, 其具有工艺简单、成本低等优点, 但收率较低。采用改进的新工艺路线，及最佳工艺条件，能有效地从啤酒废酵母中提取价值较高的核糖核酸。 关键词：核糖核酸； 提取； 酵母发酵 核糖核酸(RNA) 普遍存在于动物、植物和微生物细胞内，与蛋白质生物合成有密切的关系。微生物来源的RNA 及其降解产物核苷酸在医药、食品、保健品及农业等领域均有重要的应用价值。20 世纪60 年代，日本开始研究通过培养富含RNA 的酵母来生产RNA， 经过不断改进培养方法，目前酵母发酵[1]生产RNA 的工艺已相当成熟。我国莆田糖厂利用富含RNA 的酵母工业化连续发酵生产RNA， 菌体RNA 含量可达到菌体干重的14%～15%年产量达到200 吨。我们主要综述利用富含RNA 的酵母发酵制备RNA 的研究进展及其应用。 一、核酸的概况RNA纯品为白色粉末，有酸味，溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂，具有吸收RNA还是一种两性电解质，含有大量的酸基，因而它的等电点处在 1、RNA构成 核糖核酸由许多核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成，其主要组成核苷酸为腺苷酸、鸟苷酸、胞苷酸和尿苷酸。 2、RNA的分类 核酸是一种高分子化合物，普遍存在于生物细胞中，可分为两类，一类是脱氧核糖核酸，另一类是核糖核酸（缩写为RNA），作为多数生物细胞以及部分的病毒、类RNA作为一类重要的生物大分子之一，在20世纪50年代RNA是具有重要生物学功能的另一种核酸，其含量在原核细胞中约占6%，在11%。RNA一般是单链的大分子，不构成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则，形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也RNA结构功能的不同，主要分三类，即rRNA， mRNADNA序列转录而成的蛋白质合成模板； tRNA是mRNA上遗传密码的识别者和氨基酸的转运者； rRNA是组成核糖体的部分，而核糖体是蛋白质合成的机械。 1.2 RNA 的应用 RNA是一类生命活动中极其重要的生物大分子，在生命中基因表达和蛋白质RNA在医药卫生、保健、农业生产、食品加工等行业的应用前景十分广阔。 (1) 环保方面的应用 RNA也具有举足轻重的作用。RNA及其衍生物可以作为抗(2) 医药行业的应用 RNA除直接用于临床医学药物外，还是其它许多药物的前体RNA的研究也引起了人们的广泛关注，大量研究表明：反义RNA能够准确高 (3)卫生保健行业的应用 RNA的能力也会逐渐随之减弱。因此，人体RNA以及组织结构成分的不足，就会使人产生各种衰老症状，身体容易疲劳，(4)食品工业的应用 RNA在食品行业也有广泛的应用，能够增强人的体质，延长寿命。, 主要与肌苷酸和谷氨酸一起用作增强食品风味的食品添加剂。 二 酵母发酵法制备RNA 2.1 啤酒废酵母提取RNA 的研究现状 2005 年许宁等在常温下采用淡盐提取核糖核酸，与常规的低温浓盐法相比，在保证较高回收率的前提下，缩短了生产周期，降低能耗，回收的核糖核酸产品纯度大于90%，浊度小于20%，用该方法提取核糖核酸，并同时回收脱核酵母后，酿造工序废水的BOD 和COD 均有较大幅度的降低。2008 年李珊，吴振强采用盐法提取啤酒废酵母RNA 进行研究，用方差分析处理，实验结果表明：酵母浓度8%，抽提温度95 度，抽提时间6 小时是提取啤酒废酵母RNA 的适宜条件，并将其用于啤酒厂废酵母泥的RNA 提取试验，得率为3.23%。得出盐法优化工艺提取啤酒废酵母干粉中的RNA，得率达1.64%左右，与常规盐法提取相当。 核糖核酸和它的降解物核苷酸、核苷[4]及其衍生物都是生物化学和医学研究中的宝贵试剂。目前，从微生物中提取核酸的方法主要有盐法、稀碱法、机械法、氨法、自溶法、酶法等。 2.2核糖核酸的提取 稀盐法提取核糖核酸的原理： 稀盐法[5]提取核糖核酸是基于改变酵母细胞的渗透压，加热使细胞自身破裂而释放出核糖核酸。当菌体外盐浓度高，细胞内盐浓度低时，细胞内的水分就向细胞外渗透，细胞内物质浓度不断上升，渗透压不断升高，当达到一定值时，细胞就会自身破裂，而释放出核酸。利用核酸溶于水和在等电点溶解度最小的性质，调节PH 值，使其从溶液中沉淀下来，洗涤离心收集