水稻类囊体膜脂-PowerPoint文档.pptVIP

* * 南通大学生命科学学院 朱 素 琴 水稻类囊体膜脂磷脂酰甘油(PG)分子种组成与低温光抑制敏感性的关系 Relationships between Composition of Molecular Species of Phosphatidylglycerol (PG) of Thylakoid Membrane Lipid and Sensitivities to Low Temperature Photoinhibition in Rice (Oryza sativa L.) 类囊体磷脂酰甘油(PG)因具有较多的饱和脂肪酸和一种特殊的脂肪酸16:1(3t) 而被认为是一种对温度最为敏感、在降温过程中最先发生相变(Phase transition temperature)、从而影响膜流动性的分子（Murata N等，1983）, 是一种涉及光合作用活动和植物抗寒性的重要磷脂。 CH2－O－CO－R1 | CH－O－CO－R2 | CH2－O P CH2 | | CH2OH CHOH －O－ 引 言 1.1 实验材料 粳稻品种9516 (j-9516)、 籼型杂交稻汕优63(i-SY63) 、 j-9516和i-SY63杂交稻 (ji-95SY)为实验材料， 　在10升盆钵中播种，盆栽于网室自然温光条件下，用常规方法栽培管理。 材料与方法 本文以大面积生产的高产粳稻9516(j-9516)、籼型杂交稻汕优63(SY63)、j-9516和i-SY63杂交稻 (ji-95SY)为研究对象，采用高效液相色谱(HPLC)、酶解方法和薄层色谱技术，研究水稻类囊体膜脂PG分子种组分与低温光抑制敏感性关系，为抗低温光抑制的转基因技术奠定分子基础。 1.2 实验方法 1.2.1 低温中等光处理与低温弱光处理 将灌浆期的盆栽水稻移入人工气候室内， 分别在100和600μmol m-2 s-1 两种PFD（光源为石英卤素灯）和11℃温度下处理5d。照光12 h（6:00-18:00），黑暗12h，相对湿度78-82%。 在处理的第0 (处理前1d)、1、3、5d的18:00取功能旗叶并分成两组，一组叶片于液氮中固定，用于膜脂分析等，另一组用于测定PSⅡ电子传递活力和经暗适应20min后进行叶绿素荧光参数测定。 1.2.2 类脂的分离与提取 类脂的提取 将2 ml类囊体 4.5ml氯仿:甲醇(1:2，V/V)混合液中 振荡混匀，静置10分钟 + 2.7 ml KCl (1 mM)和1.5 ml氯仿 氯仿:甲醇:KCl的最终体积比达到1:1:0.9 离心10分钟(3000 rpm) 收集含有膜脂的下层溶剂 浓缩 -20℃下贮存。 双向薄层层析法分离膜脂 层析板(GF型，10 cm×10cm)购自青岛海洋化工厂。 第一向展开液为丙酮:甲苯:水(91:30:8，V/V) 第二向展开液为氯仿:甲醇:异丙胺:浓氨水(65:35:0.5:5，V/V)。 在紫外灯(254nm)下确定不同膜脂在薄板中的位置。 1.2.3 脂肪酸组分分析 按俞国红、苏维埃（1996）方法，甲酯化采用等体积的0.4mol/L KOH的甲醇溶液和苯-石油醚溶液（1:1, V/V）处理。岛津GC-17A气相色谱仪分离脂肪酸，毛细管柱为SP-2330(supelco Inc)，柱长15m，内径0.32mm。测定用柱温165℃，进样和氢火焰检测器温度为250℃。脂肪酸标准样品均购自Sigma公司。 1.2.4 PG脂肪酸的定位分析 参考Kito等（1985）方法，制备的PG首先用磷脂酶C水解, 酶解产物二酰甘油(DAG)被3,5-二硝基苯甲酰氯（DNBC衍生化）, 得到1,2-二酰基-sn-3-(3, 5-二硝基苯甲酰基)甘油（DAG –DNB），然后进行反相高效液相色谱 (Agilent 1100 series, USA) 分析。 C | |