表面增强拉曼光谱法测定饮料中4―甲基咪唑和2―甲基咪唑.docVIP

表面增强拉曼光谱法测定饮料中4―甲基咪唑和2―甲基咪唑 　　摘要：以金纳米粒子为拉曼活性基底，采用便携式拉曼仪进行分析，建立了饮料中4甲基咪唑（4MeI）和2甲基咪唑（2MeI）的表面增强拉曼光谱分析法，并对检测条件进行优化。在最优条件下（Na2SO4溶液为团聚剂，金纳米粒子用量分别为250和200 μL），4MeI和2MeI的线性范围分别是0.05～5.00 mg/L和1.0～20.0 mg/L，检出限分别为1.70 μg/L 和0.21 mg/L；将本法应用于含焦糖色素饮料中4MeI和2MeI 的检测，4MeI含量在0.093～0.110 mg/L之间，2MeI 无检出。回收率分别为80.2%～82.7%和78.1%～93.5%， 相对标准偏差均小于7.1%。本方法简单、快速、准确，为含焦糖色素饮料中4MeI和2MeI的快速检测提供了新方法。 　　关键词 ：表面增强拉曼光谱法；4甲基咪唑；2甲基咪唑；焦糖色素；饮料 　　1 引 言 　　焦糖色素，又称焦糖、焦糖色，是一种在食品中广泛应用的着色剂，常用于酱油、饮料、巧克力等食品的着色。在以氨法或硫酸铵法生产的焦糖色素中，4甲基咪唑（4Methylimidazole， 4MeI）和2甲基咪唑（2Methylimidazole， 2MeI）两种同分异构体以副产物的形式存在，且4MeI具有致癌作用[1～4]。1974年，联合国粮农组织及世界卫生组织（FAO/WHO）食品添加剂委员会规定，由氨法生产的焦糖色素中4MeI含量不得超过200 mg/kg，亚硫酸铵法生产的焦糖色素中4MeI含量不得超过250 mg/kg。目前，4MeI和2MeI的常用检测方法有薄层色谱法[5]、毛细管电泳法[6]、高效液相色谱法[7，8]、气相色谱质谱法[9～12]、液相色谱串联质谱法[13～15]等。但这些方法大多存在分析时间长、仪器昂贵、操作复杂等缺点。因此，建立一种快速、准确测定食品中4MeI和2MeI的新方法具有重要意义。 　　表面增强拉曼光谱（Surfaceenhanced Raman spectroscopy， SERS）作为一种新型光谱分析技术，具有灵敏度高、分析速度快、检测成本低、检测设备便携、可实现原位实时检测等优点，已逐步发展成为一种具有广泛应用前景的分析检测手段，在食品安全检测领域显示出巨大的应用潜力[16～22]。本研究采用表面增强拉曼光谱法对3种含焦糖色素饮料中的4MeI和2MeI进行检测，为各种含焦糖色素饮料中4MeI和2MeI的快速检测提供了新方法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　DeltaNu Inspector便携式拉曼光谱仪（美国DeltaNu公司）；SQP电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）；DF101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；B260型恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；SB5200D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；GZX9146 MBE数显鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。 　　4甲基咪唑（98%，百灵威试剂公司）；2甲基咪唑（98%，阿拉丁试剂公司）；KAuCl4?2H2O（含金48%～50%，阿拉丁试剂公司）；柠檬酸三钠（分析纯，沈阳市试剂三厂）；三氯甲烷、无水乙醇、KNO3、Na2SO4等试剂（分析纯，广州化学试剂厂）；实验用水为超纯水；3种饮料（包括风味饮料，果蔬饮料和碳酸饮料）购于广州市海珠区某超市。 　　2.2 金纳米粒子（AuNPs）的制备 　　参考文献＼[23＼]的方法并略有改进，将200 mL超纯水与1.00 mL 2%（w/w）HAuCl4溶液加入三口圆底烧瓶后，在140℃油浴锅中加热搅拌至沸，沸腾5 min后，加入1.48 mL 1%（w/w）柠檬酸钠溶液，加热反应40 min后移开热源，冷却密封保存于暗处，制成的金纳米粒子呈紫红色。 　　2.3 标准溶液的配制 　　准确称取4MeI和2MeI标准品各10 mg（精确至0.0001 g）， 以超纯水溶解并定容至10 mL，配制成1000 mg/L标准储备液；标准储备液用超纯水稀释，配成50.0 mg/L标准中间液。以超纯水将标准中间液配制成各所需浓度的标准工作液，储备液于4 ℃贮存。 　　2.4 样品处理 　　量取1 mL样品于250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸钠水溶液5 mL，加三氯甲烷无水乙醇萃取液（8∶2， V/V）20 mL，剧烈振摇5 min。静置分层后，将有机相移入另一个分液漏斗中，水相再按同样方法萃取一次，合并有机相；用100 g/L Na2CO3洗涤提取液3次，每次10 mL。将有机相通过无水Na2CO3滤入旋转蒸发瓶中