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酶免分析仪校准方法的探讨 　　摘 要：酶免分析仪广泛应用于医药、生物、卫生等领域的实验、检测和分析过程，但目前并没有相应的规程或规范作为酶免分析仪的校准依据。本文对酶免分析仪的组成部分和工作原理进行了归纳和分析，依据现有的量值溯源方法和体系对酶免分析仪的校准和量值溯源进行了探讨。 　　关键词：酶免分析仪；校准方法；量值溯源 　　中图分类号：R446 文献标识码：A 　　1.酶免分析仪组成结构和工作原理 　　全自动酶免分析仪又称全自动酶免分析系统和全自动酶免工作站，可以全自动完成酶联免疫吸附测定（ELISA）试验，包括稀释、样本分配、试剂分配、温育、洗板、酶标判读、结果打印等全步骤。该仪器广泛应用于医药、生物、卫生等领域的实验、检测和分析过程，尤其是在医疗卫生检测行业中酶免分析仪更是必不可少的检测仪器，在各种传染病检测、优生优育初筛检测、糖尿病、肿瘤检测等都有着广泛的应用。 　　酶免分析仪主要由酶标系统、温育系统、移液系统和洗板系统组成。其中：移液系统负责定量向酶标板样品杯中加入样品、酶结合物或反应底物；温育系统负责控制反应温度，使抗原与抗体有效结合；酶标系统是酶免分析仪的核心部分，其原理是依据酶标记的免疫复合物与酶的相应底物能够产生显色反应，显色程度与被检测样品中待测抗体或抗原的含量相关，根据显色物吸光度值确定待测物质含量，不同待测显色物质有其各自的特征吸收谱线，并遵守朗伯-比尔定律；洗板系统是酶免分析仪中的一个重要部件，用以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质及杂质，样品杯是否清洗干净，是决定酶免分析仪检定结果是否正确的关键因素之一。 　　2.酶免分析仪主要校准项目 　　根据酶免分析仪的工作原理和组成结构，可以分别对酶标系统、温育系统、移液系统和洗板系统进行校准和量值溯源以达到对整机校准的目的。因此本规范参考了JJG 861-2007《酶标分析仪检定规程》的技术指标来作为酶免分析仪酶标系统部分的技术指标。酶免分析仪的孵育系统与培养箱的功能相似，且酶免分析仪广泛地应用于各种传染病检测、优生优育初筛检测、糖尿病、肿瘤检测等方面，因此本规范选取了比较常用的行业标准WS/T 223-2002《乙型肝炎表面抗原酶免分析仪检验方法》和JJF 1101-2003《环境试验设备温度、湿度校准规范》作为孵育系统技术指标的参考。酶免分析仪移液系统无论在使用的量程范围上还是使用的精度上都符合JJG 646-2006《移液器检定规程》的适用范围，所以本规范参考JJG 646-2006《移液器检定规程》来制定移液系统的技术指标。因此酶免分析仪的计量特性和技术指标见表1。 　　3.酶免分析仪的主要校准设备 　　分光光度计（波长示值误差优于1nm）；光谱中性滤光片：吸光度标称值分别：0.2Abs、0.5Abs、1.0Abs、1.5Abs（不确定度≤0.01Abs）；分析天平（精度十万分之一）；数字温度计（最小分度不低于0.1℃）；蒸馏水。 　　4.酶免分析仪校准方法 　　4.1 波长示值误差和波长重复性 　　将仪器特征波长滤光片放在分光光度计的样品槽里，利用分光光度计的扫描功能，测出峰值，测量3次取平均值与理论值之差为仪器波长示值误差△λ，取3次测量的极差为波长重复性δλ。 　　4.2 吸光度示值误差 　　依次选用405nm、450nm、490nm、630nm或仪器特有的波长，对吸光度分别为0.2、0.5、1.0、1.5的标准滤光片以空气为参比进行测量，连续测量3次，记录仪器示值并计算其平均值。吸光度示值误差△A按公式（3）计算： 　　4.3 吸光度通道差异 　　在450nm波长下，将吸光度为1.0的标准滤光片放在不同通道下以空气为参比进行测量，并记录吸光度示值。通道差异δA 按公式（4）计算： 　　4.5 孵育系统温度波动和温场均匀性 　　对中部测温点连续测量30分钟，记录温度示值最大值T中部max和最小值T中部min，孵育系统温度波动σT按公式（6）进行计算： 　　4.6 移液容量相对误差和重复性 　　保证室内环境有良好的控温条件，将酶免分析仪和纯水在恒温条件下放置一段时间，使其温度与室温相同。取干净的样品杯放在电子天平上，待天平示值稳定后，按下归零键使天平复零。设定好移液器移液的体积，用酶免分析仪的移液器将纯水移入样品杯中。记录纯水的温度，将样品杯放在电子天平上，记录此时天平显示的数值，重复测量6次，记录每一次的重量值mi。按照公式（8）算出20度时的实际移液容量V20： 　　4.7 洗板系统最大残留量 　　将洗涤液全部换为纯水，将温度计插入纯水中，待温度计示值稳定5min后测定纯水的温度。选1个干净的样品杯放入天平中称量，得到空杯质量M0。把该样品杯放入空的酶标板中，开启洗板系统用纯