第三部分尖孢镰刀菌转GFP研究.docVIP

第 尖孢镰刀菌转GFP研究 1 材料 菌株与质粒：尖孢镰刀菌古巴专化型菌株Foc-3076。质粒pCT74（图11）是美国Oregon大学Ciuffetti博士惠赠真菌Pyrenophora tritici-repentis的ToxA启动子，具有潮霉素B磷酸转移酶基因，已经被广泛应用于多种植物病原真菌（张欣，2007；Lorang et al., 2001）。 图11 质粒图谱 Fig.11 Map of PCT 74 主要化学试剂：稳渗剂主要是山梨醇溶液 [STC含1.2 mol·L-1山梨醇或蔗糖、10 mmol·L-1 Tris-HCl (pH 7.5)、50 mmo1·L-1 CaCl2]，PTC溶液 [含40 %PEG4000、50 CaCl2、10 mM Tris-HCl (pH 7.5)]，0.8 mol·L-1 NaC1。 裂解酶：溶壁酶 (Lysing Enzyme，购自广东微生物所) ，崩溃酶 (Drislase，购自Sigma公司)。 供试实验仪器：摇床，PCR仪，电泳，冷冻离心机，打孔器，荧光显微镜，激光共聚焦显微镜Leica SP5）等。 培养基：PSB培养基：马铃薯200 g蔗糖20 g加水至1000 mL； PSA培养基：马铃薯200 g蔗糖20 g琼脂粉l5 g加水至1000 mL； 半固体再生培养基：马铃薯200 g蔗糖 200 g琼脂9 g