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甲氨蝶呤通过内质网应激途径预防膝关节粘连 陈 辉，李小磊，颜连启，孙 钰，梁 远，赵 帅，朱耿耀，戴纪杭，何 俊，王静成(扬州大学临床医学院(苏北人民医院)骨科，江苏省扬州市 225001) 引用本文：陈辉，李小磊，颜连启，孙钰，梁远，赵帅，朱耿耀，戴纪杭，何俊，王静成. 甲氨蝶呤通过内质网应激途径预防膝关节粘连[J].中国组织工程研究，2016，20(24):3615-3620. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.24.018 ORCID: 0000-0003-0877-9074(陈辉) 文章快速阅读： 文题释义： 内质网应激：内质网应激是一种诸多理化作用因素导致的亚细胞的病理状态，具体表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集和钙离子平衡的紊乱，进而激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和 caspase-12 介导的凋亡通路等信号途径，既能产生保护效应，同时也能诱导细胞凋亡，故而内质网应激与多种疾病的发病密切相关。 膝关节粘连：膝关节创伤或者膝关节术后出现的关节粘连，是影响患者膝关节功能的常见原因之一。膝关节粘连的主要原因，是由于血肿形成及长期固定所致的关节内瘢痕粘连，临床主要表现为膝关节屈伸受限和股四头肌挛缩等症状。 摘要 背景：目前膝关节瘢痕粘连的病理学机制尚不明确，多数学者认为成纤维细胞过度增殖是膝关节瘢痕粘连的主要原因。 目的：观察甲氨蝶呤通过内质网应激诱导成纤维细胞凋亡及其预防膝关节粘连的作用。 方法：①体外培养成纤维细胞，以10-5-10-9mol/L的甲氨蝶呤处理，加入PBS作为空白对照，24 h后检测成纤维细胞的活力变化，Hoechst33342染色观察甲氨蝶呤处理对成纤维细胞凋亡的影响。Western-blot检测内质网应激和凋亡相关蛋白cleaved PARP，CHOP，Bcl-2，Bax表达情况。②制备膝关节粘连模型，18只健康雄性新西兰大白兔随机分为3组，局部应用不同质量浓度的甲氨蝶呤，分别为2 g/L组、1 g/L组和生理盐水对照组，观察其预防膝关节粘连的效果和瘢痕组织中CHOP的表达情况。 结果与结论：①甲氨蝶呤能有效抑制成纤维细胞的增殖和活力，呈现出明显的浓度依赖的趋势；②Hoechst染色发现甲氨蝶呤处理组的凋亡细胞明显多于对照组；③Western-blot检测显示甲氨蝶呤处理后的成纤维细胞随着时间延长，cleaved-PARP表达及CHOP、bax的表达量升高，bcl-2的表达量降低。④动物实验结果显示甲氨蝶呤能有效预防兔膝关节瘢痕粘连，2 g/L组的效果优于1 g/L甲氨蝶呤组，甲氨蝶呤处理组的瘢痕中CHOP的表达量明显高于对照组，而2 g/L甲氨蝶呤组的CHOP表达量也高于1 g/L甲氨蝶呤组。⑤结果说明，甲氨蝶呤能通过内质网应激诱导成纤维细胞凋亡，预防兔膝关节瘢痕粘连。 关键词： 组织构建；组织工程；瘢痕粘连；甲氨蝶呤； 内质网应激；细胞凋亡；国家自然科学基金 主题词： 瘢痕；甲氨蝶呤；内质网；细胞凋亡 基金资助： 国家自然科学基金8137197181501870) Methotrexate prevents knee intraarticular adhesion via endoplasmic reticulum stress signaling pathway Chen Hui, Li Xiao-lei, Yan Lian-qi, Sun Yu, Liang Yuan, Zhao Shuai, Zhu Geng-yao, Dai Ji-hang, He Jun, Wang Jing-cheng (Department of Orthopedics, Subei People’s Hospital, Clinical Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China) Abstract BACKGROUND: The pathogenesis of knee intraarticular adhesion is yet unknown. Excessive proliferation of fibroblasts is considered to cause knee intraarticular adhesion. OBJECTIVE: To study the preventive effects of methotrexate on knee intraarticular adhesion t