创新设计-学业水平考试2016-2017高中生物（浙江专用浙科版）选修一 课件 第一部分 微生物的利用1-2 .ppt

第2课时　分离以尿素为氮源的微生物 【学考报告】 一、以尿素为氮源的微生物 1．尿素 又称 ，是 的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的 中都含有尿素，大量尿素的存在对环境造成污染。 【典例剖析】 下列有关叙述，不正确的是 (　　) A．脲是一种有机化合物，含有氮元素 B．地表土壤中含有一定量的脲 C．以尿素为氮源的细菌含有脲酶 D．在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会导致培养基呈酸性 (1)土壤中含有一定量以尿素为氮源的细菌，这些细菌可产生降解尿素的脲酶。 (2)脲在脲酶作用下会产生碱性物质NH3，从而造成培养基或土壤呈碱性。 二、分离以尿素为氮源的微生物 1．实验原理 (1)以尿素为氮源的微生物含有 酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。 (2)尿素固体培养基的唯一氮源为 ，只有能合成 的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源生长繁殖，缺乏 的微生物则由于不能分解尿素而不能生长繁殖，所以，用该培养基能够筛选分离出以 为氮源的微生物。 (3)脲酶可使尿素分解产生氨，从而可使加入酚红指示剂的尿素固体培养基变 。 2．实验步骤 (1)倒平板 在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的 培养基和 培养基，在 旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上 ，平放至 。 (2)制备细菌悬液 在无菌条件下，将1 g土样加到有 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，即成10－2土壤稀释液。依此法制备10－3、10－4和10－5土壤稀释液。取样时，尽量只取 。摇匀，放在试管架上。 (3)用 法分离细菌 取10－4和10－5的土壤稀释液各 mL，分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，再将保存在 中的玻璃刮刀(或涂布器)放在 上，待刮刀(或涂布器)上火焰熄灭，在 旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 小贴士　涂布分离操作图示 (4)培养 将培养皿 ，在37 ℃ 中培养24～48 h。 (5)观察 3．实验结果 (1)与稀释度为10－5相比，培养基中的平均菌落数在10－4处理中 。 (2)在相同稀释度的情况下，尿素培养基中的平均菌落数 于LB培养基中的平均菌落数，其原因是 。 (3)在尿素培养基上的菌落周围会出现 的环带。 请回答： (1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用________进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布________个平板，通常以每个培养皿中有________个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。 (2)接种后的培养皿______于37 ℃的恒温箱中培养。若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现______，这是由于尿素被分解产生氨气，与该培养基中的_________________产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。 (3)分离能利用尿素的细菌时所用的培养基成分上最主要的特点是________________________________________。 (4)下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是(多选) (　　) A．称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分 B．倒平板 C．涂布平板 D．微生物的培养 (5)与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是_______________________________________________________ _____________________________________________________。 解析　(1)涂布分离法必须先用无菌水对土样进行一系列的梯度稀释，通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。(2)接种后需倒置培养皿恒温培养。含有脲酶的细菌能够将尿素分解，产生的氨气使培养基呈碱性，导致培养基中的酚红指示剂呈红色。(3)分离能利用尿素的细菌时所用的培养基应以尿素为唯一氮源的固体培养基。(4)进行微生物培养和分离时，倒平板、涂布平板均需要在酒精灯火焰旁进行，以防杂菌污染。(