天花粉蛋白对胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１凋亡影响的体外研究.docVIP

天花粉蛋白对胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１凋亡影响的体外研究 　　[摘要]目的: 探讨天花粉蛋白（TCS）抗肿瘤的机制,为TCS在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法:采用流程式细胞仪检测胃癌细胞株SGC-7901凋亡。结果：50、100、200 μmol/L TCS能够诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SGC-7901的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。结论：TCS能诱导胃癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。 　　[关键词]天花粉蛋白；胃癌；细胞凋亡 　　[中图分类号]R979.1 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）06（a）-130-02 　　天花粉蛋白（TCS）是一种从中药恬楼块根内分离提纯的单链核糖体失活蛋白，具有抗炎、解热、抗氧化、抗过敏等作用[1]。天花粉蛋白具有抗早孕[2]、抗HIV[3]、免疫调节[4]及抗肿瘤等多种生物活性，对抗早孕、抗HIV、免疫调节等机制已进行了大量研究，但有关其抗肿瘤机制研究较少。笔者采用从中药天花粉中提取的天花粉蛋白作用于胃癌细胞株SGC -7901,从细胞凋亡的角度，探讨天花粉蛋白诱导胃癌细胞凋亡的作用机制，为中药天花粉蛋白在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。 　　 　　1 实验材料与方法 　　1.1 仪器 　　流式细胞仪(Fluorescence activated cell sortor，FACS)，Annexin V-PE，Apoptosis Kit I，Cycle TES TTM PLUS DNAReagent Kit(均为BectonDickinson公司试剂）。TCS，江苏天晴制药总厂产品，RPMI 1640培养基(Sigma)， 　　1.2 细胞培养 　　胃癌细胞株SGC-7901用含10%的小牛血清、青霉素(100 μmol/L)、链霉素(1 mg/ml)的RPMI 1640培养基，置37℃,5%CO2孵箱内静置培养。 　　1.3 早期细胞凋亡的检测 　　按AnnexinV-PE，Apoptosis Kit I操作手册进行检测。 　　1.4 细胞周期变化检测 　　培养瓶中细胞消化制成单细胞悬液，均匀接种于6孔培养板，2个时段各种2块板，移入CO2孵箱静置培养。次日，细胞贴壁生长良好。每块板的6个孔分别设为对照组和不同浓度药物组，每孔加药10 μl，使药物终浓度为50、100 μmol/L，将6孔板移入CO2孵箱，在37℃,5%CO2及饱和湿度环境下静置培养。药物作用48、72 h后，分别收集每孔细胞放入FCM检测专用试管中，行FACS检测。DNA含量分析按Cycle TES TTM PLUS DNA Reagent Kit操作手册进行检测。 　　1.5 统计学处理 　　用SPSS10.0软件包处理实验数据，采用ANOVA方法进行统计学分析。 　　 　　2 结果 　　2.1 早期细胞凋亡率 　　胃癌细胞株SGC-7901在50、100、200 μmol/L TCS浓度作用72 h，结果提示凋亡率与剂量呈正相关，分别为9.03%、13.12%、14.15%（表1）。 　　2.2 细胞周期的变化 　　通过FACS对DNA含量分析结果显示,同对照组细胞相比，50 μmol/L的TCS作用48、72 h后，SGC-7901细胞明显阻抑在G1期，并与时间变化呈正相关(表2)。TCS诱导SGC-7901细胞凋亡的凋亡率与浓度变化呈正相关(表3)。 　　 　　3 讨论 　　已知细胞凋亡在控制细胞增殖、肿瘤发生和生长中起着重要作用，研究表明，许多人类恶性肿瘤是其细胞的凋亡过程严重受阻，而使肿瘤细胞在数量上无限制恶性增生的结果[4]，这种增殖与死亡的平衡失调被认为是由细胞凋亡的调节紊乱引起的，但在胃癌方面，天花粉蛋白诱导胃癌细胞凋亡的作用机制目前尚不清楚。本实验研究结果表明TCS具有一定程度上的诱发SGC-7901细胞凋亡的作用，与对照组存在非常显著性差异(Ｐ0.01)。SGC-7901细胞被明显阻抑在G1期，TCS能诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡，并与TCS剂量呈正相关。细胞凋亡与肿瘤发病的关系为抗癌药物的研究提供了新的药理学机制和新靶点[5]，作为抗肿瘤药若能大量地诱发癌细胞的凋亡，激活其自发的程序性死亡过程，就可避免因大量细胞坏死而释放胞内物质引起的各种副作用，减轻化疗对正常组织的损伤，延长患者的生存期。 　　TCS对SGC -7901肿瘤细胞凋亡的影响实验结果表明， TCS对肿瘤细胞的凋亡有一定的促进作用。有文献报道， TCS可增强小鼠ＮＫ细胞的细胞毒活性，而ＮＫ细胞引起的靶细胞死亡是凋亡，而本次研究结果表明，T