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荧光免疫标记技术课件.ppt
本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! 相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网biomean进行咨询,期待您的加入 荧光免疫标记技术 知识目标 技能目标 素质目标 1.重点掌握免疫荧光显微技术、免疫荧光技术在医学检验中的应用 2.熟悉荧光的基础知识、荧光免疫分析常用仪器和设备 3.了解荧光抗体的制备 1.会使用荧光显微镜等常用仪器和设备 2.会用荧光免疫技术检测抗原抗体 3.能将荧光免疫测定与临床应用相联系 通过学生相互鼓励、严谨、认真操作,各小组共同协作完成任务,培养了与人合作、与人沟通的能力 任务目标 1 荧光标记物的制备 2 荧光免疫组织化学技术 3 其他荧光免疫技术 任务对象 任务过程 复习提问 案例导入 讲解与示教 学生操作 讨论分析 评价、考核 课后思考题 教 学 环 节 2′ 30′ 2′ 10′ 40′ 5′ 1′ 患儿,男,间断发热五天,伴咳嗽3天。体温最高39度,病程第2天查血常规正常,诊断“呼吸道感染”并静滴“阿奇霉素”3天,无明显改变,即而出现咳嗽,为阵发性刺激性咳嗽,少痰,胸片提示:双肺纹理增粗,右上肺片影。复查血常规仍正常。患儿肺部感染系哪种病原体所致? 如何快速诊断? 案例导入 老师纠正 点评 学生操作 一位学生 操作演示 学生分组 再操作 【主要试剂与器材】 1.抗原基质片 固定有核抗原,可采用小鼠肝组织切 片或印片经丙酮固定即可。目前有商品化试剂供应。 2.标记抗体 FITC标记的羊抗人IgG,有商品化试剂供 应。临用时稀释至工作浓度。 3.0.01mol/L pH7.2PBS。 4.缓冲甘油 9份甘油和1份PBS混匀。 5.待检血清,阴性、阳性对照血清。 6.其它 荧光显微镜、染色缸、吸管、微量加样器等。 实验操作 【操作方法】 1.自冰箱中取出抗原基质片,平衡至室温,用记号笔画圈标记。 2.将待检血清和对照血清用PBS作1∶10稀释,用微量加样器加50μl待检血清或对照血清于基质片上,水平置于湿盒中37oC温箱反应30min。 3.以PBS冲洗抗原基质片,再分别浸于盛有PBS染色缸中,反复漂洗3次,每次5min。 4.取出玻片,吹干,加50μl最适工作浓度的标记抗体,平置于湿盒内,37oC温箱反应30min。 5.重复步骤3,洗去未结合的荧光抗体。 6.滴加缓冲甘油封片,用荧光显微镜观察。 实验操作 【结果判断】 1.荧光显微镜下见肝细胞核呈黄绿色,为阳性;反之为阴性。 2.根据荧光分布情况,可分为四种荧光核型: ⑴均质型:细胞核呈均匀一致的荧光。 ⑵周边型:细胞核周围呈现荧光,核中央染色弱或无荧光。 ⑶斑点型:细胞核呈现斑点状荧光。 ⑷核仁型:核仁部分呈现荧光。 实验操作 实验操作 【注意事项】 1.滴加的血清或标记抗体应充分覆盖满抗原片。样品之间防止交叉污染。反应时应置于湿盒内,防止干燥。 2.每次冲片应彻底,防止非特异荧光的干扰。 3.荧光受温度影响较大,不能及时观察时应注意低温避光保存。 实验操作 【应用与评价】 荧光抗体技术应用较广,可用于病原微生物鉴定及其抗体的检测;自身免疫病自身抗体的检测,免疫细胞表面抗原的检测等。 此方法检测ANA,主要用于初步筛查,具有简便、快速、敏感等特点。 实验操作 讨论分析 提 出 问 题 展 开 讨 论 用什么可以 观察到荧光? 为什么有荧 光就能做出 诊断? 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。 该技术的主要优缺点 主要优点:特异性强、敏感性高、速度快。 主要缺点:非特异性染色问题尚未完全解 决,结果判定的客观性不足,技术程序也还比较复杂。 免疫荧光技术 讨论分析 免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合。 以荧光素作为标记物,与已知的抗体(或抗原)结合、但不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂,用于检测和鉴定未知的抗原。 在荧光显微镜下,可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体
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