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2012-07-28 承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计：蓝江林 试验项目：琅岐猪场垫料菌株分离及大肠杆菌沙门杆菌鉴定 试验人员：王 凯 试验负责：蓝江林 报告日期：2012-07-28 计数月份：2012年07月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话:0591传真:0591 1．试验目的 检测发酵床垫料中微生物的种类与数量，以及致病菌株大肠杆菌和沙门杆菌的种类和数量，并根据实际情况对垫料进行有效的处理和管理。 2．试验方法 2.1供试材料 琅岐猪场发酵床垫料，1号样品取自小猪仔舍，2号样品是2年发酵床垫料，3号样品取自保育猪舍。 2.2培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（NA）：牛肉膏3 g、NaCl 5 g、蛋白胨10 g、水1000 mL、pH7.2-7.5。 伊红美兰琼脂培养基（EMB）：蛋白胨10g、乳糖10g、磷酸氢二钾2g、2%伊红水溶液20ml、0.5%美蓝水溶液13ml、蒸馏水1000ml，琼脂20-30g，pH7.2-7.4，121℃高温高压灭菌15min。 亚硫酸铋琼脂培养基（BS）：蛋白胨10g、牛肉膏5g、葡萄糖5g、亚硫酸铋0.3g、煌绿0.025g、磷酸氢二钠4g、柠檬酸铋铵2g、亚硫酸钠6g，琼脂18—20g、pH7.5，蒸馏水1000ml，搅拌煮沸冷却至50℃倒板（临用前一天配置）。 2.3仪器 试管、锥形瓶100 mL，移液枪，涂布棒，玻璃棒，培养皿，振荡器，恒温培养箱，扫描仪。 2.4试验方法 2.4.1制备样品稀释液 称取样品10g于装有90ml无菌蒸馏水的三角瓶中充分震荡，制备成10-1的稀释度样品溶液。用1ml移液枪吸取1ml悬液加入盛有9ml无菌蒸馏水的试管中充分振荡，制备成10-2稀释液，如此依次制成10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释液。 2.4.3平板涂布分离 超净台上无菌操作，溶液在振荡器上振荡10-20s，吸取100μL至相应标记浓度的NA、EMB和BS培养皿中央，用无菌涂布棒涂布均匀，静置片刻使菌液吸附进培养基。每个梯度重复2次。 2.3.3培养 将涂布后的NA、EMB和BS平板用袋子包好，倒置于30℃恒温培养箱中培养2d。 2.5计数 统计平板上的菌落数，描述菌落形态、大小等，算出每一稀释度菌落的平均数。菌落数计算公式：每克土样中微生物的数量＝同一稀释度的菌落平均数×稀释倍数×10。 3．试验结果 3.1NA培养基菌株分离 从1号垫料中工分离到6株细菌，见表1，总微生物两为13.6×107cfu/ml。 表1 1号垫料中分离的菌株形态及菌落数 样品号 编号 形态特征 菌落数(×107cfu/mL) 1-1 大，光滑，灰黄色，湿润，圆形，扁平，边缘整齐，不透明 0.1 1-2 中，光滑，粉色，湿润，近圆形，隆起，边缘波纹状，不透明 0.6 1-3 大，不光滑，乳白色，干，圆形，褶皱，边缘整齐，不透明 0.1 1-4 中，光滑，灰黄色，湿润，圆形，扁平，边缘整齐，，不透明 0.8 1-5 极小，不光滑，乳白色，干燥，不规则，褶皱，边缘不整齐，不透明 7 1-6 小，光滑，灰白，湿润，圆点，隆起，整齐，透明 5 含量总计(×107cfu/m) 13.6 从2号垫料中共分离到3株细菌，见表2，总微生物量为18.4×107cfu/ml。 表2 2号垫料中分离的菌株形态及菌落数 样品号 编号 形态特征 菌落数(×107cfu/mL) 2号垫料 2-1 大，光滑，粉色，湿，近圆形，隆