第六章分光光度分析测定方法.ppt.ppt

待测试液的差示透光率TD： 待测组分 (普通透光率) 参比液 (普通透光率) 如： 将90～100这个刻度扩展到原标尺的10倍，标尺的放大倍数= 90％→0％ 93％→30％ 2. 低吸收差示法的原理(A与c关系？) 差示吸光度： 待测组分的吸光度Ax： 可见： 与 不成线性关系(与高吸收不同) 3. 低吸光度差示法的测量误差 微分： (4)式除以(3)式得： 可见：① 愈大( 愈小)调零参比液→ 愈小 ② 一定时， 太小（ 大）→ 愈大 作 曲线: 结论：①调零参比溶液浓度愈小( )误差 愈小 ② 与 愈接近，放大倍数愈大，提高精密度 ③适用于低浓度组分(Ax1)的测定 缺点：① 调零，纯溶剂：调100％。 实际中常相互制约， 一般需多次反复调节才能以实现， 使实际操作不方便。因此实际应用较少。 ②差示吸光度AD与 不呈线性关系，易导致误差增大。 四. 最精密差示法(高精密度差示法) 是高吸光度法和低吸光度法相结合而成的。 特点：用两个标准溶液作参比溶液 ①用稍高于 的标液 作参比调T＝0， ②用稍低于 的标液 作参比调T＝100％ ③测待测试液 的差示透光率T(或AD) 1. 方法 2. 原理 差示吸光度： 可见：差示吸光度 AD 与待测试液浓度Cx 不呈线性关系 3. 测量误差 微分： (6)式除以(5)式得： 可见：(c2-c1)愈小，即(T1-T2 )愈小→ 愈小 结论：① c2 与 c1 愈接近，测量误差愈小， ② c2 与 c1 愈接近，放大倍数愈大，精密度越高。 缺点：① c2调零， 纯溶剂：调100％。 相互影响，一般需多次反复调节才能以实现，有时受 调节器功能的限制，甚至难以实现。 ②差示吸光度AD与Cx 不呈线性关系，易导致误差增大。 因此，实际应用较少。 五. 全差示光度法 ①一给定值反向微电流 i 向左(透光率为0％一端)扩展一恒定值， ②用一参比标准溶液 调节透光率100％， ③测待测试液的Tx或TD 1. 方法 ①收到最佳精密差示法的效果， ②克服了最佳精密差示法的缺点(2个参比调零相互影响，因其用了一反向微电流) ③可用于高、中、低，微量组分的差示光度分析。 2. 优点 六. 差示光度法的实验技术条件 配以强光源，狭缝调节装置和提高检测器灵敏度，使光度计能在广泛读数范围内调节透光率， 吸收池应严格选择，进行校正(否则标尺放大后，误差大)。 1. 光源 2. 吸收池 温度对测量精密度的影响，差示法比普通法的影响更为严重，应控制±2℃内，高精密度测量，应有恒温装置，使±0.2℃，有的光度计附有恒温装置及相应吸收池架。 3. 温度控制 第六章 分光光度分析测定方法 第一节 一般方法(经典方法) 第二节 最小二乘法(一元线性回归方程) 第三节 差示分光光度法 对于实际样品的分析应根据分析对象及目的选择适当的光度测定方法以得到准确、可靠的分析结果。 第一节 一般方法(经典方法) 一. 绝对法 单组分测定(试样中只含一种组分)、混合物中待测组分的?max不位于其他共存组分的吸收波长处(即共存组分不干扰，在?max处无吸收)，采用绝对法。 在?max处： ? 值在波长一定下是一常数，可查得，由A计算c。 共存组分 待测组分 A ? ? A 选择原则：“吸收最大，干扰最小” 灵敏度 选择性 待测组分 二. 标准对照法(比较法) 在分析波长处测量标准溶液、试样溶液的吸光度： （同一物质, ?相同） 三. 标准曲线法 对不同浓度(已知)的标准溶液测定吸光度，绘制A～c标准曲线(工作曲线)；在相同条件下测定样品溶液吸光度，从标准曲线上查知对应的浓度。 四. 吸光系数法 ( →1cm＝b，c 浓度为1％时的α) ：测定得出的? 。 ：标准物质在已校正过的不同型号光度计上多次测定计算出的比吸光系数，也可从手册上查得。 第二节 最小二乘法 一元线性回归方程法 回归直线所根据的原则是使所有测定数据的偏差的平方和达到最小，由于平方运算属于“二乘”运算，因此通常称为“最小二乘法”。 经典法：单一浓度标准溶液测定A，可靠性不大(绝对法，标准对照等)。 一系列浓度标