整合素α3在髓母细胞瘤干细胞中的表达及对侵袭作用的影响.docVIP

整合素α3在髓母细胞瘤干细胞中的表达及对侵袭作用的影响 　　【摘要】 目的 研究整合素α3在髓母细胞瘤干细胞中的表达及其对侵袭作用的影响。方法 应用免疫磁珠法（MACS）从髓母细胞瘤标本中获得CD133+和CD133-细胞， 通过免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测CD133+ 和CD133-两组细胞中整合素α3的表达， 运用transwell细胞侵袭实验观察使用整合素α3抗体和未使用整合素抗体对CD133+侵袭作用的影响。结果 整合素α3在CD133+组的表达显著高于CD133-组（P0.01）；使用整合素α3单克隆抗体组穿膜细胞数目为（26.53±3.71）， 低于空白对照组的（54.76±6.27）（P0.01）。结论 整合素α3在髓母细胞瘤干细胞的侵袭中起重要作用。 　　【关键词】 髓母细胞瘤；干细胞；整合素α3；侵袭 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.30.013 　　【Abstract】 Objective To research expression of integrin α3 in medulloblastoma stem cells and its influence on invasion effect. Methods Magnetic activated cell sorting （MACS） was applied to taken CD133+ and CD133- cells from medulloblastoma samples. Immunohistochemistry and real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （PCR） were used to detect expression of integrin α3 in CD133+ and CD133- cells. Influence by application of integrin α3 antibody on CD133+ invasion effect was observed by transwell cell invasion assay. Results Expression of integrin α3 in CD133+ group was obviously higher than that in CD133- group （P0.01）. Monoclonal antibody had lower transmembrane cell number by integrin α3 as （26.53±3.71） than （54.76±6.27） in the blank control group （P0.01）. Conclusion Integrin α3 shows important effect in invasion of medulloblastoma stem cells. 　　【Key words】 Medulloblastoma； Stem cells； Integrin α3； Invasion 　　髓母细胞瘤是儿童最常见的脑恶性肿瘤， 容易复发， 同时易沿蛛网膜下腔播散转移。肿瘤细胞的侵袭性生长是一个多步骤的复杂过程， 有多种生物化学因子参与其中[1， 2]。本研究通过检测髓母细胞瘤干细胞中整合素α3的表达， 同时应用抗整合素单克隆抗体， 观察其对侵袭作用的影响。现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料 髓母细胞瘤干细胞取自2013年～2015年河南省人民医院神经外科手术标本。 　　1. 2 方法 　　1. 2. 1 髓母细胞瘤干细胞的培养和鉴定 肿瘤手术标本剪碎后胰蛋白酶消化， 吹打成单细胞悬液；过滤、离心收集细胞， 培养于神经干细胞培养液中（含Neurobasal培养基、1：50 B27添加剂、20 μg/L成纤维细胞生长因子、20 μg/L表皮细胞生长因子）， 在37℃、 5%CO2细胞培养箱中培养， 培养所得细胞呈神经球状生长。 　　1. 2. 2 免疫磁珠法分选CD133+和CD133-细胞 使用免疫磁珠细胞分选试剂盒（Mihenyi Biotech公司）分离出CD133+和CD133-细胞， 并使用流式细胞分析仪进行纯度测定。 　　1. 2. 3 逆转录定量PCR（QRT-PCR）检测 QRT-PCR检测分选后 CD133+细胞、CD133-细胞中整合素α3的表达， 上游引物5-GGAAGGAACAAAGACAGGCAAAC-3， 下游引物5-GGTA GTGGTGAGTGAGAAGTGGC-3