CSFV、PPV、PRV以及PRRSV多重PCR方法的建立以及初步应用.pdf

ofthe10th of AssociationofAnimaland Science ProceedingsSymposiumBiologic——a—l——B—ra——nch,Chinese Veterinary 在此结果中，免疫牛仅免疫了一次普通苗，攻击强毒后两个试剂盒同时检出了相同的阳性动物，证实了动物 免疫低剂量的口蹄疫疫苗，当有口蹄疫活毒的攻击时，仍有少数动物体内有活病毒的繁殖，但却没有临床症 状，这就有造成持续感染的危险。所以只有免疫高剂量的疫苗，才能预防此类持续感染的发生。 (本文特别感谢中牧股份大客户部经理薛景山及吕红副厂长的指导) 赵耘，秦玉明，张广川，赵启祖，宁宜宝，戴志红，谢磊 (中国兽医药品监察所，国家猪瘟参考实验室北京100081) [摘 要] 猪瘟病毒、猪细小病毒病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍，对养猪生产 影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法，分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性 10 10 100 10 10 进行了测定，结果表明其敏感性可达到CSFVTCID50，PPVTCID50，PRRSV1TCID50，PRVTCID50CSFVTCIDso，PPV 100 TCID50，PRRSV TCID500同时具有较好的特异性，对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、 1TCIDs0，PRV PPV弱毒疫苗株、PRRSVKY35株及PRRSV 方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 [关键词]猪瘟病毒；猪细小病病毒；猪繁殖和呼吸综合征病毒；猪伪狂犬病病毒；多重PCR J。目前在很多猪场都同时 猪繁殖障碍疾病的4种病原体¨J。这4种疾病是猪的多发病，常呈混合感染怛’3’4 存在这4种疾病，严重影响养猪生产。因此，对这4种病毒进行鉴别诊断具有十分重要的意义。这几种疾病 的诊断通常采用常规的病原学和血清学检测方法，这些方法往往耗时长、繁琐或敏感性差。因此有必要建立 快速的早期诊断方法，以便尽快采取有效的防治措施，减少这些疾病对养猪业造成的损失。多重PCR技术 是指在同一反应体系中，加人多对引物，对多个目的基因同时进行扩增的方法。本研究利用4对特异引物建 立了4种病毒的多重PCR方法，以期达到快速检测的目的。 1材料和方法 1．1病毒PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSVKY35株、CSFV石门强毒株及猪瘟兔化弱毒疫苗株，均 由中国兽医药品监察所鉴定、保存。PRRSV国内分离株B13株由中国兽医药品监察所保存。猪瘟野毒株6 鉴定；PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV 10“～、PPV10～、PRRSV10。～。CSFV石门强毒为血毒，病毒滴度 增殖，其病毒滴度(TCID50)分别为PRV (MLD)为≥10～。 *基金项目：国家重点基础研究发展规划项目(G1999011905) 作者简介：赵耘(1968～)，女，陕西西安人，副研，博士，主要从事动物病毒分子生物学研究。E—mail：zhaoyun@ivdc．gov．cn —102— 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 TGCCCATAGTAGGACTAG CSFV上游引物：5’一CCA C一3’ TGA1TTCACCCTAGC 下游引物：5’一ATG GAC C一3’ PPV上游引物：5’--CAACAGATCTCTAGGACTGC--3’ 下游引物：5’一GTG，GTrAAGTGTCCATGTIGG一3’ PRRSV上游引物：5’一GCGAATFCATGGCCAGCCAGTC