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洁净区沉降菌监测规程 目的： 建立洁净区（室）中沉降菌的监测规程，保证药品在规定的洁净级别内进行生产。 2. 依据： 国家标准GB/T 16294-1996。 3. 范围： 本标准适用于洁净区（室）的沉降菌的监测。 4. 职责： QA洁净度监测人员、 QC微生物检验员对本标准的实施负责。 5. 程序： 定义： 5.1.1. 洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自 身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允 许统计数。 5.1.4. 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。 通常用个数表示。 5.2. 测试方法： 5.2.1. 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 5.2.2. 所用的仪器和设备： 高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿： 5.2.2.3.1. 一般采用ф9omm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。 使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 5.2.3. 培养基：普通营养琼脂培养基。 5.2.3.1. 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养 皿，每皿约15ml。 5.2.3.2. 待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的环境中存放。 5.2.4. 测试步骤： 5.2.4.1. 采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。 5.2.4.2. 培养： 5.2.4.2.1. 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 5.2.4.2.2. 在30~35℃培养，时间不少于48h。 5.2.4.2.3. 每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只 培养皿作对照培养。 5.2.4.3. 菌落计数： 5.2.4.3.1. 用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。 若培养皿上有2 个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 5.2.5. 注意事项： 5.2.5.1. 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.2.5.2. 采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.2.5.3. 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.2.5.4. 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面 仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5.2.5.5. 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 5.3. 测试规则： 5.3.1. 测试状态； 5.3.1.1. 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在 报告中注明测试状态。 5.3.2. 测试人员： 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。 5.3.3. 测试时间: 5.3.3.1. 对单向流，如100级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 5.3.3.2. 对非单向流，如10000级，100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。 沉降菌计数： 5.3.4.1. 采样点数目及其布置； 最少采样点数目： 沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。 表1.最少采样点数目 面积（m2） 洁净度级别 100 10,000 1