L亮氨酸的生产、应用及育种思路.pdfVIP

发酵工翟U开舅，会· 第十九坎年会材料 L一亮氨酸的生产、应用及育种思路 山东省食品发酵工程重点实验室 刘建军赵祥颖田延军等 是常见十八种氨基酸中的一种，也是人体八种必需氨基酸之一，另外由于L一亮氨酸和L一异 chain 亮氨酸、L-撷氨酸的分子结构中都含有一个甲基侧链而被称为支链氨基酸(Branched amina acids，BCAA)。 1L一亮氨酸的分子结构及其物理化学性质 L一亮氨酸分子式为C6H1302N，相对分子量131．18，结构式为： 刚3丁HC一3 OOH L·亮氨酸为白色结晶或结晶粉末，‘是一种非极性氨基酸，味微苦，溶于水，20*(2、250 ， 148(2时升华，293-2950C时分解，比重 溶于醇(0．729lL)，不溶于醚，加热到145人r i．29(180C)，。比旋光度【a】D20为+14．5人一+16．0(6mol／LHcl，C=1)，等电点5．98。 2L-亮氨酸的生产方法 一 味的强化剂，开始了工业化生产氨基酸的历史。1957年日本开始运用微生物进行谷氨酸发酵 生产，从此揭开了微生物发酵方法生产氨基酸的历史新篇章。20世纪六十年代左右，关于L一 亮氨酸生物合成以及其代谢调节机制相继阐明。‘这为微生物发酵法生产L一亮氨酸定向育种及 酶法生产L一亮氨酸提供了理论基础。 L一亮氨酸的生产方法主要有提取法、化学合成法、酶催化法、微生物发酵法等。 2．1蛋白质水解法 氨基酸是蛋白质的组成单位，在酸性条件下，将L一亮氨酸含里较高的蛋白质水解，得到 各种氨基酸的混合物，经分离、纯化、精致等工序获得L一亮氨酸产品。 。我国大部分厂家采用蛋白质水解法生产L一亮氨酸。蛋白质水解法生产L一亮氨酸的优点 是生产设备简单，技术要求不高，并且L一亮氨酸在蛋白质中的含量较高。但是蛋白质水解法 生产的缺点是费时、污染严重、收率低、产品质量得不到保证，大规模生产受到限制。 ● ● 2．2化学合成法 成法原理简单，价格低廉，但操作复杂，反应条件苛刻，副产物多，产率不高，并且有的方法 涉及到有毒物质。化学合成法得到亮氨酸是消旋的DL—亮氨酸，为了得到L一亮氨酸，必须 进行光学异构体的拆分。因此化学合成法很少用于L一亮氨酸的生产。 2．3酶催化法 酶催化法生产L一亮氨酸通常是利用转氨酶转氨给a一酮基异己酸生成L一亮氨酸．将相 关的酶和NADH共价结合在膜上，让底物缓缓地经过膜而进行酶催化反应生成L一亮氨酸。如 er 1981年，Wichmanna1．建立了一种用超滤膜制成的膜反应器，膜上共价结合了亮氨酸转 氨酶、甲酸转氨酶、和NADH，当底物。一酮基异己酸通过膜反应器后，可被催化生成L一亮 氨酸，其中NADH通过甲酸同步氧化成C02实现再生。 酶法生产氨基酸的优点是转化能力强，可避免代谢调控中的反馈抑制和反馈阻遏，并且其 生物反应器紧凑，产物组分相对单一，易进行后工序加工处理，可以提高产品质量，降低成本。 但酶法生产中所用到的酶需通过微生物发酵生成并提取精制，工艺过程比较复杂，且成本较高， 因此目前尚未得到广泛的应用。如果能够低成本获得高酶活的酶，则酶法生产L一亮氨酸是一 条经济可行的工艺路线。 2．4微生物发酵法 2．4．1添加前体物发酵法 13032发酵57h，可生 中添加前体物。一酮基异己酸的浓度为209／L，谷氨酸棒杆菌ATCC L一亮氨酸，质量转化率91—96％；而采用分批流加培养法，可流加a一酮基异己酸 成169／L 32