L色氨酸生产的研究进展.pdfVIP

发蕾孝工程研究会 j弘。卜九坎专≈会材牵4， 卜色氨酸生产的研究进展 中国食品发酵工业研究院北京100027 西北大学生命科学学院 西安710069 陈俊峰1，2 王卫卫2， 王璋1， 摘要：本文介绍了目前L．色氨酸生产的主要方法，包括化学合成法、微生物发酵法、和 酶促转化法，同时讨论了基因工程育种和高密度培养方法在L-色氨酸发酵生产中的应用。 关键词：L色氨酸，微生物发酵法，酶促转化法，基因工程菌 L．色氨酸是人体和动物生命活动中必须的八种氨基酸之一，对人体和动物的生长发育、 新陈代谢起着重要的作用，被称为第二必须氨基酸，广泛用于医药、食品和饲料等方面。在 生物体内，L．色氨酸是合成5．羟基色胺、吲哚乙酸、烟酸、色素、生物碱和辅酶等激素和生 理活性物质的前体物，而这些激素和生理活性物质参与生物体内的一些特定生命代谢活动。 近年来，随着对L一色氨酸生理功能了解和科学研究的不断深入，L．色氨酸的应用越来越广泛， 世界上对其需求量也越来越大。现在，世界上对其需求量已经达到10000吨以上，而目前全 世界实际生产量只有1000多吨，其中产量最大的日本，其产量达400多吨，约占全世界总 产量的三分之一。以前由于色氨酸生产方法难、价格高，除医药以外未能大量应用。目前欧 美各国利用色氨酸的营养补品以大量上市，而今后的主要增长部分则会是饲料用部分。因而， 色氨酸可能会继赖氨酸和蛋氨酸之后，成为饲料和食品添加剂的第三种氨基酸。所以，目前 在氨基酸行业，色氨酸的研制最为活跃。 目前L广色氨酸的生产方法主要有蛋白质水解法、化学合成法、微生物发酵法和酶促转化 法四种。 1、蛋白质水解法和化学合成法 L．色氨酸的生产最早主要是依靠化学合成法和蛋白质水解法制造。蛋白质水解法是以毛 发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料，通过碱水解法和酶水解法生产L．色氨酸。随着氨基酸生 产技术的发展，现在已很少使用该法生产L．色氨酸。 化学合成法就是利用有机合成和化学工程相结合的技术生产或制备氨基酸的方法。DL． 色氨酸的化学法合成，大致可分为以吲哚为原料的合成法和以苯肼为原料的合成法两种。 ● ● 在下利用吲哚和a．乙酰氨基丙烯酸直接缩合，得到N．乙酞．DL．色氨酸，此物在氢氧化钠溶 色氨酸，即在乙酸钠存在下，将丙烯醛和乙酰氨基丙二酸二乙酯缩合，缩合体再与苯肼反应 而生成苯腙，苯腙在H2S04或BF3水溶液中回流水解，环化得到化合物3．吲哚基．甲基．乙酰 氨基．丙二酸二乙酯，将此化合物水解脱羧可得DL．色氨酸。 。化学合成法的最大优点是在氨基酸品种上不受限制，既可制备天然氨基酸，又可制各各 种特殊结构的非天然氨基酸。但这并不意味着具有工业生产价值，由于合成得到的氨基酸都 是DL．型外消旋体，必须经过拆分才能得到人体能够利用的L．氨基酸。故用化学合成法生产 DL．色氨酸时，除需考虑合成工艺条件外，还要考虑异构体的拆分与D．色氨酸异构体的消旋 利用，三者缺一不可。因此，化学合成L-色氨酸在工业上的应用也受到一定的限制。 2、酶促转化法 酶法是利用微生物中L．色氨酸生物合成酶系的催化功能生产L-色氨酸的，能够利用化工 合成的前体物为原料，既充分发挥了有机合成技术的优势，又具有产物浓度高、收率高、纯 度高、副产物少、精制操作容易等优点，是一种成本较低的生产色氨酸的工业化生产方法。 目前在L．色氨酸的生产中应用较为广泛。这些酶包括色氨酸酶、色氨酸合成酶、丝氨酸消旋 酶等。根据提供这些酶的微生物种类数，可以分为双菌酶法和单菌酶法两种类型。 双酶菌法是利用两种菌分别提供酶促反应所需的色氨酸合成酶(TS)、丝氨酸消旋酶 和DL．丝氨酸为底物，在200L反应罐中反应24h，L．色氨酸产量可达到1 109／L，对吲哚收 率为100％(mol比，下同)，对DL．丝氨酸收率为91％。 由于底物吲哚对色氨酸合成酶抑制强