实验一小鼠骨髓染色体的制备-基础医学院-河北大学.ppt

实验一 小鼠骨髓细胞染色体的制备和观察 医学遗传学实验 小鼠骨髓染色体的制备和观察 实验目的 实验原理 仪器、材料与试剂 实验步骤 实验报告及思考题 一、 实 验 目 的 1、学会小鼠骨髓染色体的制 备方法 二、实验原理 染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质存在的特定形式，是染色体紧密包装的结果。染色体是有机体遗传信息的载体，对染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中有十分重要的作用。 三、仪器、材料与试剂 1、器材：光学显微镜，恒温水浴锅，冰箱，低速离心机，解剖器械（搪瓷解剖盘，探针，剪刀，镊子），脱脂棉，酒精灯，试管，试管架，磨口试剂瓶，滴管，注射器（1ml），染色缸，清洁载玻片（实验前将载玻片浸入50％酒精溶液中，置4℃冰箱中至少1h）。 四、实验步骤 1、取材：小鼠脱颈处死。剪开腹腔，剥离后肢，由股骨关节处剪断，取下后肢。剪去骨骼外的肌肉，用棉花蘸75%的酒精来回搓，直至骨骼外再没有任何肌肉。剥离股骨，将股骨头的两段剪去少许，然后用4号针头插入骨髓腔，将股骨穿通。将带6号针头的注射器插入骨髓1／2处，然后将股骨浸入到含0.85％生理盐水的离心管中，操纵注射器将骨髓细胞全部冲洗到离心管中，直至骨髓腔呈白色为止。然后轻轻抽打离心管中的细胞，尽可能使其分散。 5、制备悬液：根据管底细胞的多少，加入0.3-0.5ml新配制的固定液，用吸管抽打均匀，形成细胞悬液。 6、制片：将预冷的载玻片倾斜45OC，将细胞悬液从约30-50cm高处向每个载玻片上滴1－2滴。吹散，在酒精灯火焰上过几遍。 五、实 验 报 告 及 思 考 题 实验报告 1．找出你制备最好的几个分裂相视野，数出染色体条数。 2．画出你所看到的一个中期分裂相的图像。 3．总结制备成功或失败的经验 * * 河北大学基础医学实验教学中心 2、小鼠骨髓染色体的基本形态 特征和数目 处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态。 本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗、固定、滴片染色等处理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。 2、材料：小鼠（体重20g左右） 3、试剂：0.85％生理盐水，固定液(甲醇：冰醋酸以3：1（体积分数）配制)， Giemsa染液，75％酒精，蒸馏水， 0.04％秋水仙素，0.075mol/L KCl。 2、秋水仙素处理：将细胞悬液加入1ml 秋水仙素混匀，1000rpm，离心8－10 min，弃上清。 3、低渗处理：加入5ml在37 OC预热的0.075mol/L KCl溶液，用吸管轻轻抽打均匀。置37 OC水浴低渗处理15 min。 4、固定：低渗处理后，立即加入5ml新配制且预冷的固定液，抽打均匀，然后1000 rpm离心8 min，弃上清。 7、染色：将载玻片自然风干，用Giemsa染色，根据染色效果，染色6－10min后，用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。 8、镜检：先用低背倍镜找出分散好的分裂相视野，再换高倍物镜观察，应该看到很多中期分裂相细胞，细胞被染成蓝色，细胞核及染色体被染成淡紫色。 *