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基因工程实验设计
成员：潘嘉立，危威，刘礼彪，
张睿，谭娟，邓文静
基因工程实验设计
一、 目的基因的获取
Arabis hirsuta isolate Ahirs2-1 alcohol dehydrogenase gene, complete cds
GenBank AF110444.1
硬毛南芥Ahirs2-1酒精脱氢酶
ORIGIN
1 ATGATTACCA CCGGACAGAT TATTCGATGC AAAGCTGCTG TGGCATTTGA AGCCGGAAAA
61 CCACTGGTTA TGGAGGAAGT AGAGGTTGCT CCGCCGCAAA AAAATGAAGT TCGTATCAAG
121 ATCCTCTTCA CTTCTCTTTG TCACACCGAT GTTTACTTCT GGGAGGCAAA GGGACAAACA
181 CCGTTGTTTC CTCGTATCTT CGGTCATGAA GCTGGAGGGA TTGTGGAGAG TGTTGGAGAA
241 GGTGTGACTG ATCTTGCACC AGGAGATCAT GTGTTACCGA TCTTCACCGG AGAATGTGGT
301 GATTGTCCTC ATTGTCACTC TGAGGAATCA AACATGTGTG ATCTTCTCAG GATCAACACC
361 GAACGAGGAG TGATGATAAA CGACGGTGAA TCGAGGTTCT CTATTGATGG GAAACCGATT
421 TATCATTTTG TTGGGACATC AACGTTTAGT GAATACACTG TGGTTCACTC TGGTCAAGTC
481 GCTAAGATCA ATCCTGATGC TCCTCTTGAT AAAGTCTGCA TTGTTAGTTG TGGTTTATCT
541 ACTGGGNTAG GAGCTACTTT GAATGTTGCT AAACCGAAAA AGGGTCAAAG TGTTGCGATT
601 TTCGGACTCG GTGCTGTTGG TTTAGCCGCT GCTGAAGGTG CTAGAATCGC TGGTGCTTCT
661 AGGATCATTG GTGTTGATCT CAACTCGAAG AGATTCGATG AAGCTAAGAA ATTCGGTGTG
721 ACCGAGTTTG TGAACCCGAA AGACCATGAC AAACCTGTTC AACAGGTGAT CGCTGAGATG
781 ACGGATGGTG GAGTTGACCG GAGTGTGGAG TGTACTGGAA GCGTTCAGGC CATGATTCAA
841 GCATTTGAAT GTGTTCACGA TGGTTGGGGT GTTGCGGTGC TTGTTGGTGT GCCAAGCAAA
901 GACGATGCCT ACAAGACTCA TCCAATGAAT TTCCTGAATG AGAGAACTCT CAAGGGTACT
961 TTCTTTGGGA ACTACAAACC AAAAACTGAC ATTCCCGGGC TTGTCGAAAA GTACATGAAC
1021 AAGGAGCTGG AGATTGAGAA ATTCATCACT CACACAGTGC CATTCTCGGA GATCAACAGG
1081 GCCTTTGATT ACATGTTGAA GGGAGAGGGT ATCCANTGCA AAATCACCAT GGGTGCTTGA
二、引物设计
正向引物: 5-CCCAAGCTTATGATTACCACCGGACAGAT -3 (66.7 ℃)
反向引物： 5-CGCGGATCCTCAAGCACCCATGGTG-3 (70℃)
三、强碱法提取pUC-19 质粒DNA
试剂：1、溶液1（GTE）：50mmol/l 葡萄糖、10mmol/l EDTA-Na2、 25mmol/l Tris-Cl（pH8.0）、4mg/ml 溶菌酶
溶液2：200mmol/l NaoH、1%SDS
溶液3：5mol/l KAC 60ml、冰乙酸 11.5ml、ddH2O 28.5ml
2、苯酚-氯仿
3、异丙醇（或95%乙醇，100%乙醇）
4、70%乙醇
5、TE（pH8.0）：10mmol/l Tris-Cl（pH8.0）、1mmol/l EDTA-Na2
6、
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