NMDA干预下Rab30在PC12细胞中的表达及凋亡通路.docVIP

NMDA干预下Rab30在PC12细胞中的表达及凋亡通路 　　摘 要 探讨兴奋毒性氨基酸（NMDA）损伤干预下Rab30在PC12细胞中的表达及其凋亡通路，发现NMDA干预可能通过下调Rab30和GM130的表达，使高尔基体结构破裂成片，并可能通过上调GAAP和Caspase3的表达，诱导PC12细胞的凋亡和死亡. 　　关键词 PC12细胞；Rab30；神经退行性疾病；兴奋毒性氨基酸；凋亡 　　中图分类号 Q189文献标识码 A文章编号2016 　　The Expression and Apoptosis Pathway of Rab30 　　in PC12 Cells Under NMDA Interventions 　　ZHU Huiguo， YAN Li， WANG Jia* 　　（Hunan Institute of Gerontology， Hunan Provincial Peoples Hospital， Changsha 410016， China） 　　Abstract In this work， we report a study of the expression and apoptosis pathway of Rab30 in PC12 cells under injury interventions of NMDA. Our results show that NMDA interventions are likely to break the structure of golgi into pieces through downgrading the expression of Rab30 and GM130， leading to the induction of the apoptosis of PC12 cells through adjusting the expression of GAAP and Caspase3. 　　Key words PC12 cells； Rab30； neurodegenerative diseases； NMDA； apoptosis 　　高尔基体（Golgi apparatus，GA）在神经退行性疾病病理条件下和各种损伤机制（兴奋毒性氨基酸、钙超载、炎症因子、氧自由基等）下会出现应激反应，其结构发生变化，甚至发生碎裂[13].Rab30作为一种重要的调节型的运输蛋白，参与维持非神经细胞高尔基体结构完整[4]，可能参与损伤机制下神经细胞高尔基体碎裂的调控，从而导致神经元丧失.本研究对PC12细胞进行兴奋氨基酸毒性（NMDA）损伤干预，并借助细胞培养技术、MTT法检测PC12细胞存活率、Annexin VFITC/PI双染法检测细胞凋亡、Westernblot法检测目的蛋白表达情况等实验技术，从细胞及分子水平研究NMDA干预下Rab30在PC12细胞中的表达并探讨其凋亡通路.本研究希望为神经退行性疾病的病因及病理机制提供理论和实践依据，进而为神经退行性疾病药物治疗提供新的靶点. 　　1 实验材料与试剂 　　PC12细胞株（购自中国科学院上海细胞生物研究所）；1640培养基（Hyclone），胎牛血清和胰酶消化液（Gibco），青链霉素溶液（碧云天），NMDA 和MTT（Sigma），Rab30（ORIGENE），GAAP和GM130（Proteintech），Caspase3（CST），Annexin VFITC/PI双染细胞凋亡（长沙维尔生物有限公司），BCA蛋白定量试剂盒（Wellbio），HRP goat antimouse IgG（Proteintech），HRP goat antirabbit IgG（Proteintech），Super ECL Plus 超敏?l光液（Thermo pierce），显影液和定影液（WellBiology）. 　　2 实验方法 　　2.1 细胞培养 　　PC12细胞株用完全培养基（含胎牛血清10%和1640培养液90%及100 U/mL 青链霉素混合液），pH值调至7.2～7.4， 于37 ℃下，5%CO2的饱和湿度培养箱中培养，1～2天换液，待PC12细胞生长汇合率达80%左右，用0.05%胰蛋白酶消化，一分为二传代，取对数生长期的细胞进行实验研究. 　　药物浓度配制及实验分组：将25 mg NMDA溶于1 mL DMSO溶液中，储液浓度为169.9 mmol/L.取2.9 μL加入到10 mL完全培养基中，终浓度为50 μmol/L.PC12细胞分别经正常情况下培养5 h（正常组）、加入50 μmol/L NMDA培养5 h（NMDA